[發(fā)明專利]一種基于硅膠基質(zhì)的原生質(zhì)體固定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210246018.0
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN103540583A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷榮;喬文婕;蔣弘山;王新一;朱水芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N11/04
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.一種原生質(zhì)體固定化方法，包括如下步驟：

（1）將原生質(zhì)體進(jìn)行海藻酸鈣包埋，得到包被有所述原生質(zhì)體的海藻酸鈣珠；

（2）利用硅膠基質(zhì)通過硅膠溶膠-凝膠法將步驟（1）所得的海藻酸鈣珠進(jìn)行包埋，得到包埋后的硅膠凝膠；

（3）將步驟（2）所得的硅膠凝膠置于可溶性檸檬酸鹽溶液中，溶解所述硅膠凝膠中的海藻酸鈣成分，得到硅膠包埋的原生質(zhì)體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述硅膠基質(zhì)的制備方法為如下（a）或（b）：

（a）以硅酸酯為前體的二步水解法：將硅酸酯在鹽酸催化下水解，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去水解產(chǎn)生的醇和部分水后，再和W1溶液以體積比1：2混合，加入甘油作致孔劑，使用前調(diào)pH至6～7，得到所述硅膠基質(zhì)；

（b）酸化硅酸鈉水溶液法：將二氧化硅含量為0.41：2.6的硅酸鈉水溶液和膠體二氧化硅水溶液等體積混合，用鹽酸調(diào)節(jié)混合溶液pH至6～7，得到硅膠基質(zhì)；

所述W1溶液的溶質(zhì)為甘露醇、2-嗎啉乙磺酸和KCl，溶劑為水，所述甘露醇在所述W1溶液中的終濃度為0.4～0.5M，所述2-嗎啉乙磺酸在所述W1溶液中的終濃度為4mM，所述KCl在所述W1溶液中的終濃度為20mM；所述膠體二氧化硅水溶液是直徑為1～5nm的二氧化硅粒子分散在水中所形成的溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法中，調(diào)節(jié)所述混合溶液pH值采用的鹽酸濃度為3.0M。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述可溶性檸檬酸鹽溶液為所述可溶性檸檬酸鹽的W1溶液，其溶質(zhì)為所述可溶性檸檬酸鹽，溶劑為所述W1溶液，所述可溶性檸檬酸鹽在所述可溶性檸檬酸鹽溶液中的終濃度為1-2.0g/100ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述溶解所述硅膠凝膠中的海藻酸鈣成分的溶解時(shí)間為45-90分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述溶解所述硅膠凝膠中的海藻酸鈣成分的溶解溫度為20-25℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述原生質(zhì)體為植物原生質(zhì)體。