[發明專利]肽、該肽的用途和生產方法以及固定有該肽的固相和其生產方法

無效

• 申請號: 201210245785.X
• 申請日: 2009-02-12
• 公開（公告）號: CN102746374A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 熊田陽一;岸本通雅;尻谷優希;濱崎今日子;大瀨琢人;小池充烈
• 申請（專利權）人: 國立大學法人京都工藝纖維大學;恩普樂股份有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K17/08
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

本申請是原申請的申請日為2009年2月12日，申請號為200980105137.0，發明名稱為《肽、該肽的用途和生產方法以及固定有該肽的固相和其生產方法》的中國專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及一種新型肽、該肽的用途和生產方法，尤其涉及對親水性的固相表現出特異性結合功能的肽、該肽的用途和生產方法。此外，本發明涉及能夠用于使用固相化法檢出或測定化合物的肽、和利用該肽檢出或測定化合物的方法。此外，本發明涉及包含形成抗原結合部位的可變區的肽，涉及免疫球蛋白分子、以及包含可變區的單鏈抗體（scFv）、多價單鏈抗體（sc(Fv)_n）、恒定區融合型單鏈抗體（scFv-Fc）、Fab片段或F(ab’)₂片段以及固定有這些肽的固相和該固相的生產方法。

背景技術

抗體（免疫球蛋白）是與抗原特異性結合的蛋白質，是生物體內的體液免疫中的主角。圖6的（a）為表示抗體（免疫球蛋白）基本結構的示意圖?？贵w分子61是2條分子量5萬～7萬的重鏈（H鏈）62和2條分子量2.3萬的輕鏈（L鏈）63這4條鏈狀多肽通過二硫鍵和非共價鍵結合而成的，整體呈Y字型。重鏈（H鏈）62由4或5個結構域構成，N末端側配置有可變區（V_H）的結構域，朝向C末端側配置有3～4個恒定區（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4）的結構域。圖6的（a）中，示出由4個結構域（V_H、C_H1、C_H2、C_H3）構成的重鏈62。輕鏈（L鏈）63由2個結構域構成，N末端側配置有可變區（V_L）的結構域，C末端側配置有恒定區（C_L）的結構域。

重鏈62和輕鏈63的可變區（V_H和V_L）被配置于N末端側的2處，兩者一體化，形成與抗原特異性結合的立體抗原結合部位。因此，抗體的特異性取決于重鏈和輕鏈的可變區（V_H和V_L）的氨基酸序列和組合，可變區（V_H和V_L）的氨基酸序列、組合根據所對應的抗原不同而不同。在各類型或亞型中，重鏈和輕鏈的恒定區（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4和C_L）為幾乎恒定的結構。

抗體分子61被蛋白酶中的木瓜蛋白酶在重鏈的C_H1和C_H2結構域之間的鉸鏈部64處分解，如圖6的（b）所示，被分解為2個Fab片段65和一個Fc片段66。通過另一種蛋白酶胃蛋白酶分解抗體分子61時，如圖6的（c）所示，能獲得的是2個Fab片段65在鉸鏈部64通過二硫鍵連接而成的結構即F(ab’)₂片段67。Fab片段65、F(ab’)₂片段67具有由重鏈和輕鏈的可變區（V_H和V_L）形成的抗原結合部位，因此，具有針對抗原的特異性，能夠用于抗原抗體反應。

進而，將重鏈的可變區（V_H）和輕鏈的可變區（V_L）通過連接肽69連接而成的結構即單鏈抗體（scFv）68，也能形成由重鏈和輕鏈的可變區（V_H和V_L）形成的立體抗原結合部位，因此，具有針對抗原的特異性，能夠用于抗原抗體反應。圖6的（d）是表示單鏈抗體（scFv）68的基本結構的示意圖。圖6的（d）中，重鏈的可變區（V_H）的C末端通過鏈狀的連接肽69而連接到輕鏈的可變區（V_L）的N末端。

由于抗原抗體反應中抗原和抗體的特異性強，如果抗原結合部位發生變化則對應的抗原也會變化，因此需要對100萬種以上的重鏈和輕鏈的可變區（V_H和V_L）的組合進行基礎性實驗以驗證其顯示何種抗原抗體反應。此外，利用抗原和抗體的特異性強這一點，可將抗原抗體反應用于各種用途和領域中。