[發(fā)明專利]肽、該肽的用途和生產(chǎn)方法以及固定有該肽的固相和其生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210245768.6
• 申請日: 2009-02-12
• 公開（公告）號: CN102816234A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊田陽一;岸本通雅;尻谷優(yōu)希;濱崎今日子;大瀨琢人;小池充烈
• 申請（專利權(quán)）人: 國立大學(xué)法人京都工藝纖維大學(xué);恩普樂股份有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K17/08;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21
• 代理公司: 北京銀龍知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

本申請是原申請的申請日為2009年2月12日，申請?zhí)枮?00980105137.0，發(fā)明名稱為《肽、該肽的用途和生產(chǎn)方法以及固定有該肽的固相和其生產(chǎn)方法》的中國專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新型肽、該肽的用途和生產(chǎn)方法，尤其涉及對親水性的固相表現(xiàn)出特異性結(jié)合功能的肽、該肽的用途和生產(chǎn)方法。此外，本發(fā)明涉及能夠用于使用固相化法檢出或測定化合物的肽、和利用該肽檢出或測定化合物的方法。此外，本發(fā)明涉及包含形成抗原結(jié)合部位的可變區(qū)的肽，涉及免疫球蛋白分子、以及包含可變區(qū)的單鏈抗體（scFv）、多價單鏈抗體（sc(Fv)_n）、恒定區(qū)融合型單鏈抗體（scFv-Fc）、Fab片段或F(ab’)₂片段以及固定有這些肽的固相和該固相的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

抗體（免疫球蛋白）是與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，是生物體內(nèi)的體液免疫中的主角。圖6的（a）為表示抗體（免疫球蛋白）基本結(jié)構(gòu)的示意圖。抗體分子61是2條分子量5萬～7萬的重鏈（H鏈）62和2條分子量2.3萬的輕鏈（L鏈）63這4條鏈狀多肽通過二硫鍵和非共價鍵結(jié)合而成的，整體呈Y字型。重鏈（H鏈）62由4或5個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，N末端側(cè)配置有可變區(qū)（V_H）的結(jié)構(gòu)域，朝向C末端側(cè)配置有3～4個恒定區(qū)（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4）的結(jié)構(gòu)域。圖6的（a）中，示出由4個結(jié)構(gòu)域（V_H、C_H1、C_H2、C_H3）構(gòu)成的重鏈62。輕鏈（L鏈）63由2個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，N末端側(cè)配置有可變區(qū)（V_L）的結(jié)構(gòu)域，C末端側(cè)配置有恒定區(qū)（C_L）的結(jié)構(gòu)域。

重鏈62和輕鏈63的可變區(qū)（V_H和V_L）被配置于N末端側(cè)的2處，兩者一體化，形成與抗原特異性結(jié)合的立體抗原結(jié)合部位。因此，抗體的特異性取決于重鏈和輕鏈的可變區(qū)（V_H和V_L）的氨基酸序列和組合，可變區(qū)（V_H和V_L）的氨基酸序列、組合根據(jù)所對應(yīng)的抗原不同而不同。在各類型或亞型中，重鏈和輕鏈的恒定區(qū)（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4和C_L）為幾乎恒定的結(jié)構(gòu)。

抗體分子61被蛋白酶中的木瓜蛋白酶在重鏈的C_H1和C_H2結(jié)構(gòu)域之間的鉸鏈部64處分解，如圖6的（b）所示，被分解為2個Fab片段65和一個Fc片段66。通過另一種蛋白酶胃蛋白酶分解抗體分子61時，如圖6的（c）所示，能獲得的是2個Fab片段65在鉸鏈部64通過二硫鍵連接而成的結(jié)構(gòu)即F(ab’)₂片段67。Fab片段65、F(ab’)₂片段67具有由重鏈和輕鏈的可變區(qū)（V_H和V_L）形成的抗原結(jié)合部位，因此，具有針對抗原的特異性，能夠用于抗原抗體反應(yīng)。

進而，將重鏈的可變區(qū)（V_H）和輕鏈的可變區(qū)（V_L）通過連接肽69連接而成的結(jié)構(gòu)即單鏈抗體（scFv）68，也能形成由重鏈和輕鏈的可變區(qū)（V_H和V_L）形成的立體抗原結(jié)合部位，因此，具有針對抗原的特異性，能夠用于抗原抗體反應(yīng)。圖6的（d）是表示單鏈抗體（scFv）68的基本結(jié)構(gòu)的示意圖。圖6的（d）中，重鏈的可變區(qū)（V_H）的C末端通過鏈狀的連接肽69而連接到輕鏈的可變區(qū)（V_L）的N末端。

由于抗原抗體反應(yīng)中抗原和抗體的特異性強，如果抗原結(jié)合部位發(fā)生變化則對應(yīng)的抗原也會變化，因此需要對100萬種以上的重鏈和輕鏈的可變區(qū)（V_H和V_L）的組合進行基礎(chǔ)性實驗以驗證其顯示何種抗原抗體反應(yīng)。此外，利用抗原和抗體的特異性強這一點，可將抗原抗體反應(yīng)用于各種用途和領(lǐng)域中。