[發(fā)明專利]一種蝦類胚胎的細(xì)胞核染色方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210245038.6
• 申請(qǐng)日: 2012-07-16
• 公開（公告）號(hào): CN102749243A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬文明;楊衛(wèi)軍;錢葉青;俞炎琴;楊帆;楊勁樹;莊浩瀚
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)舟山海洋研究中心
• 主分類號(hào): G01N1/30
• 分類號(hào): G01N1/30
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.?一種蝦類胚胎的細(xì)胞核染色方法，其特征在于該方法的具體步驟：

步驟(1).取蝦類胚胎，置于3～5倍胚胎體積的A溶液中,常溫條件下振蕩20～40分鐘，得到第一次處理后的胚胎液；?

所述的A溶液為體積比為1:1的正庚烷和多聚甲醛溶液的混合液，其中多聚甲醛溶液中多聚甲醛的質(zhì)量含量為4﹪；

步驟(2).待第一次處理后的胚胎液靜置分層后用移液槍移除上層液相，得到的固相為第一次處理后的胚胎；

步驟(3).將第一次處理后的胚胎重新加入2倍胚胎體積的正庚烷和4倍胚胎體積的甲醇，充分混合后得到第二次處理后的胚胎液；

步驟(4).待第二次處理后的胚胎液靜置分層后用移液槍移除上層溶液和中間層膜狀組織，得到第二次處理后的胚胎；

步驟(5).將第二次處理后的胚胎加入3～5倍胚胎體積的甲醇進(jìn)行洗滌，靜置分層后用移液槍移除液相，重復(fù)洗滌3～5次，得到第三次處理后的胚胎；

步驟(6).將第三次處理后的胚胎加入3～5倍胚胎體積的緩沖液進(jìn)行洗滌，靜置分層后用移液槍移除液相，重復(fù)洗滌3～5次，得到第四次處理后的胚胎；

所述的緩沖液為含有曲拉通X-100的磷酸緩沖液，緩沖液中曲拉通X-100的體積含量為0.3﹪；

步驟(7).將第四次處理后的胚胎避光浸泡在1～2倍胚胎體積的濃度為5～10ug/ml的DAPI溶液中15～30分鐘，進(jìn)行細(xì)胞核染色，得到染色后的胚胎液；

步驟(8).待染色后的胚胎液靜置分層后用移液槍移除液相，得到染色后的胚胎；

步驟(9).將染色后的胚胎加入3～5倍胚胎體積的磷酸緩沖液進(jìn)行洗滌，靜置分層后用移液槍移除液相，重復(fù)洗滌3～5次，得到最終的胚胎。