[發(fā)明專利]一種油棕體細(xì)胞胚的培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210243321.5
• 申請(qǐng)日: 2012-07-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102907320A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒積鑫;曾憲海;林位夫;張希財(cái);潘登浪;周立軍;姚行成;尤麗莉;曹建華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: ?？谙柘鑼＠聞?wù)有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

1.一種油棕體細(xì)胞胚的培養(yǎng)方法，其特征在于，其步驟如下：

1）、外植體的選取

選取樹齡8～10年的油棕母株，切取莖干生長(zhǎng)點(diǎn)上15cm至95cm處的油棕莖段，經(jīng)表面除雜、清洗后進(jìn)行消毒處理，然后將晾干后的外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，剝除外層的老葉片，得到無(wú)菌的油棕嫩葉；

2）、愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將油棕嫩葉修剪至大小為1cm×2cm的片樣，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在溫度為25～28℃，濕度為50%～65%的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)，得到愈傷組織；將得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接入胚性愈傷組織培養(yǎng)基中，在溫度為25～28℃，濕度為50%～65%的條件下暗培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；

3）、體細(xì)胞胚的培養(yǎng)

將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到胚狀體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：光照強(qiáng)度為1500～20001x，每日光照時(shí)間為12小時(shí)，溫度為25～28℃，濕度為50%～65%，每2個(gè)月繼代一次；培養(yǎng)6～12個(gè)月后在胚性愈傷組織表面會(huì)出現(xiàn)白色的胚狀體組織；所述胚狀體培養(yǎng)基是以改良MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2,4-D?0.01～0.2mg/L、水解胳蛋白200～2000mg/L、椰子水30～80ml/L、葡萄糖20～40g/L、瓊脂7g/L；

所述改良MS培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整其中的肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：0.1～5mg/L、0.1～5mg/L、0.1～5mg/L、0.1～5mg/L，并添加精氨酸50～300mg/L、天冬氨酸50～300mg/L、谷氨酸50～300mg/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油棕體細(xì)胞胚的培養(yǎng)方法，其特征在于：所述胚狀體培養(yǎng)基中添加的2,4-D、水解胳蛋白、椰子水、葡萄糖、瓊脂的添加量為：2,4-D?0.1mg/L、水解胳蛋白1000mg/L、椰子水40ml/L、葡萄糖20～40g/L、瓊脂7g/L。