[發明專利]一種脂肪酶高產菌的篩選方法

有效

• 申請號: 201210243161.4
• 申請日: 2012-07-13
• 公開（公告）號: CN102719387A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 苗君蒞;張鋒華;劉振民;肖楊;孟令潔;任璐;蔡濤;王輝
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種脂肪酶高產菌的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將篩選源樣品添加到富集培養基中進行富集培養，得到富集培養液；所述的篩選源樣品選自天然干酪、巴氏稀奶油和黃油中的任一種或多種；

(2)用無菌水稀釋富集培養液，先通過選擇性平板培養基篩選產脂肪酶的菌，挑取帶有熒光圈的單菌落，然后通過純化培養獲得純化菌株；

(3)將篩選出的純化菌株在產酶培養基中培養并收獲培養產物；

(4)離心培養產物，收集含脂肪酶的上清液；

(5)將含脂肪酶的上清液進行酶活檢測，對酶活力高的菌株進行風味驗證后獲得目標菌株。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的天然干酪選自切達干酪、大孔干酪、帕莫森干酪、黃波干酪、奶油干酪和古老耶干酪中的任一種或多種。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，

步驟(1)所述的富集培養基包括下列各組分：①蛋白胨、酵母膏/粉、牛肉膏/粉中的任一種或多種，②無機鹽和③乳化稀奶油；

步驟(2)所述的選擇性平板培養基包括下列各組分：①蛋白胨、酵母膏/粉、牛肉膏/粉中的任一種或多種，②乳化稀奶油，③凝固劑和④羅丹明；

步驟(2)所述純化培養為采用PDA平板培養基、YPD平板培養基和察氏培養基中的任一種對產脂肪酶的菌進行純化培養，獲得純化菌株；

步驟(3)所述的產酶培養基包括下列各組分：①蛋白胨、酵母膏/粉、牛肉膏/粉中的任一種或多種，②可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖中的任一種或多種，③無機鹽和④乳化稀奶油；

所述的無機鹽選自氯化鈉、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸氫二鉀中的任一種或多種；所述乳化稀奶油是用3倍體積2％(w/v)的聚乙烯醇乳化脂肪含量為35～40％的稀奶油而制得。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，

所述的富集培養基包括下列各組分：①蛋白胨0.2～0.8％，②酵母浸膏0～0.8％，③氯化鈉0～0.05％，④氯化鈣0～0.01％和⑤乳化稀奶油2.5～3.75％；上述各組分的百分比均為質量百分比；

所述的選擇性平板培養基包括下列各組分：①牛肉膏0～0.8％，②蛋白胨0.2～0.8％，③乳化稀奶油2.5～3.75％，④瓊脂1.0～1.75％和⑤羅丹明0.04～0.06％；上述各組分的百分比均為質量百分比；

所述的產酶培養基包括下列各組分：①蛋白胨0.2～0.8％，②酵母浸膏0.2～0.8％，③氯化鈉0.05～0.5％，④可溶性淀粉0.05～0.1％，⑤磷酸氫二鉀0.05～0.25％和⑥乳化稀奶油2.5～3.75％；上述各組分的百分比均為質量百分比。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，

所述的富集培養基包括下列各組分：①蛋白胨0.5％，②酵母浸膏0.5％，③氯化鈉0.05％，④氯化鈣0.005％和⑤稀奶油2.5％；上述各組分的百分比均為質量百分比；

所述的選擇性平板培養基包括下列各組分：①牛肉膏0.5％，②蛋白胨0.5％，③乳化稀奶油2.5％，④瓊脂1.5％和⑤羅丹明0.05％；上述各組分的百分比均為質量百分比；

所述的產酶培養基包括下列各組分：①蛋白胨0.5％，②酵母浸膏0.15％，③氯化鈉0.5％，④可溶性淀粉0.1％，⑤磷酸氫二鉀0.25％和⑥乳化稀奶油2.5％；上述各成分的百分比均為質量百分比。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述富集培養的方法為：在23～28℃、150～250rpm條件下，搖床培養48～72小時。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述篩選的方法為用無菌水將步驟(1)制得的富集培養液稀釋成各濃度梯度，取各濃度的培養液稀釋液均勻涂布于選擇性平板培養基上后培養48～72小時，培養溫度為23～28℃。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的培養方法為：在23～28℃、150～250rpm條件下，搖床培養48～72小時。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述收獲脂肪酶的方法為：將步驟(3)的培養產物在8000～10000rpm、10～15min的條件下進行離心，收集上清液。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)所述風味驗證的方法包括如下操作步驟：①將酶活較高的菌株接種至滅菌稀奶油中并在23～28℃、150～250rpm條件下，搖床培養48～72小時；②將發酵稀奶油進行滅酶處理；③將②中制得的酶解產物加入至脫脂奶中，經過攪拌、均質、殺菌和冷卻后，品嘗風味改變方向和改變程度，從而選擇最終的目標菌。