[發(fā)明專利]法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210242863.0
• 申請日: 2012-07-14
• 公開（公告）號: CN102732635A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李愛強;崔江平;陳力清;宋金平;張艷霞;趙麗;王項華
• 申請（專利權(quán)）人: 李愛強
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及DNA的擴增、檢測的方法，尤其涉及一種針對法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法。

背景技術(shù)

隨著我國DNA數(shù)據(jù)庫建設(shè)的不斷深入，國家?guī)霥NA數(shù)據(jù)量飛速增加，全國的生物檢材檢驗資金消耗也與日俱增，據(jù)統(tǒng)計，一年全國需投入DNA檢驗經(jīng)費約2個億。如何在保障DNA檢驗結(jié)果準確的前提下，建立一種新的DNA檢驗方法，大幅降低DNA數(shù)據(jù)庫生物檢材檢驗成本，具有重要意義。

要想在擴增方面大幅降低生物檢材DNA檢驗成本，只有通過降低擴增體系才能實現(xiàn)。目前，國內(nèi)外試劑盒擴增標準體系均為25微升。由于我國DNA檢驗人員在大量工作實踐過程中發(fā)現(xiàn)：將擴增體系縮小到10微升后，檢驗結(jié)果仍能達到峰值均衡、結(jié)果準確的要求。因此，為了節(jié)約檢驗成本，國內(nèi)DNA數(shù)據(jù)庫生物檢材DNA檢驗大部分應用10微升擴增體系。

但是，檢驗人員同時發(fā)現(xiàn)，如果進一步減小擴增體系，用常規(guī)擴增方法便會出現(xiàn)檢驗結(jié)果峰值不均衡，容易發(fā)生缺失等位基因等現(xiàn)象，造成檢驗結(jié)果不可靠。因此，無論是試劑生產(chǎn)廠家還是DNA實驗室檢驗人員均不推薦小于10微升的擴增體系。目前，在實驗室廣泛應用的10微升DNA擴增方法是，首先將9微升擴增試劑置于用于擴增的孔板中，再加入樣本檢材DNA模板?1微升，最后用蓋子密封加樣后的孔板進行擴增。擴增后，先將9微升混合好的甲酰胺及內(nèi)標混合液加入到用于檢測的孔板中，再在孔板內(nèi)加入擴增好的樣本DNA產(chǎn)物1微升，進行DNA檢測。要想降低擴增成本，必須減小擴增體系。如將現(xiàn)有擴增方法降至1微升擴增體系，需加入擴增試劑0.9微升，DNA模板0.1微升。而目前DNA實驗室常備加樣槍及自動加樣工作站等儀器設(shè)備則不能達到此加樣精度。即使達到此精度，在加蓋擴增過程中，因其擴增體系太小，擴增試劑將完全揮發(fā)干燥，造成擴增失敗。因此，如何在保障生物檢材DNA檢驗結(jié)果峰值均衡、結(jié)果準確的前提下，進一步減小擴增體系，是能否成功大幅降低生物檢材DNA檢驗成本的瓶頸。

目前，市場上有專業(yè)用于1微升擴增體系的工作站，但是其存在三個缺點：一是儀器價格昂貴，一般實驗室買不起；二是其擴增需特殊擴增儀，實驗室原有擴增設(shè)備將不能使用，造成浪費；三是雖然擴增體系減小了，節(jié)約了擴增試劑，但其擴增所需配套耗材又非常昂貴，因此，它檢驗一個檢材的消耗成本并未降低反而增加。

因此，確有必要提供一種即能利用目前DNA實驗室常用儀器設(shè)備，又能達到1微升擴增體系檢驗水平的法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法來解決上述技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題在于提供一種法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法，其可利用目前DNA實驗室常用儀器設(shè)備，達到對1微升擴增體系檢驗水平的法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增的檢驗，其能有效的降低檢驗成本。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法，包括如下步驟：

第一，DNA的擴增：先將DNA模板、擴增試劑、石蠟油置于用于擴增的孔板中，然后進行離心，在PCR擴增儀上擴增得到擴增產(chǎn)物；

第二，上樣檢測：將所述擴增產(chǎn)物、甲酰胺、內(nèi)標置于用于檢測的孔板中，然后進行離心，并在DNA分析儀上檢測。

作為本技術(shù)方案的進一步改進，DNA擴增時，先將DNA模板置于用于擴增的孔板中，然后進行加熱干燥；再依次加入石蠟油、擴增試劑，然后進行離心，在PCR擴增儀上擴增得到擴增產(chǎn)物。

作為本技術(shù)方案的進一步改進，上樣檢測時，所述擴增產(chǎn)物孔板中，直接加入甲酰胺及內(nèi)標混合液，然后進行離心，并在DNA分析儀上檢測。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的檢驗方法能利用目前現(xiàn)有的設(shè)備進行檢測，能有效降低檢驗成本，并能保證檢測結(jié)果的準確性。

【具體實施方式】

本發(fā)明提供一種利用目前DNA實驗室常用儀器設(shè)備，手工或DNA工作站自動化檢驗，達到1微升擴增體系檢驗水平的法醫(yī)生物檢材DNA小體系擴增檢驗方法，包括如下步驟：

第一，DNA擴增

本發(fā)明采用美國AB公司9600或9700型DNA擴增儀進行擴增，具體步驟如下：

1、將樣本檢材DNA模板2微升置于用于擴增的孔板中；

2、然后將孔板置于擴增儀上以99℃進行加熱，使其干燥；

3、加入石蠟油20微升；?

4、加入擴增試劑1微升；

5、對上述溶液進行離心，然后擴增，獲得擴增產(chǎn)物。

第二，上樣檢測