[發(fā)明專利]丙型肝炎病毒NS3解旋酶ATP結合位點單克隆抗體識別表位

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210242409.5
• 申請日: 2012-07-12
• 公開（公告）號: CN102766195A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設計）人: 黎誠耀;邊奕鑫;李婷婷;王文敬
• 申請（專利權）人: 南方醫(yī)科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N33/68;A61K39/29;A61P31/14;C07K16/10;G01N33/577;A61K39/42
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚志強

技術領域

本發(fā)明涉及一種丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位，其為丙型肝炎病毒NS3解旋酶ATP結合位點單克隆抗體識別表位，及使用該細胞表位刺激得到的抗丙型肝炎NS3蛋白的單克隆抗體，還涉及該細胞表位的應用和由該細胞表位刺激產生的抗體的應用。

背景技術

丙型肝炎是一種主要經血液傳播的疾病，丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細胞癌(HCC)，對患者的健康和生命危害極大，已成為嚴重的社會和公共衛(wèi)生問題。據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球HCV的感染率約為3%，估計約1.7億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例。僅中國就有大約4，000萬名HCV感染者，感染率約為3.2%，是HCV感染的高發(fā)區(qū)。大多數HCV感染者沒有癥狀或癥狀輕微，易于形成慢性感染，20～35%的慢性感染者將最終發(fā)展成肝硬化，其中每年又有大約l～4%的人發(fā)展為肝癌。

丙型肝炎目前尚無有效疫苗，也無有效的治愈方法。迄今最有效的抗HCV的治療僅限于干擾素與利巴韋林聯(lián)合使用，效果在不同基因型之間有很大差異，持續(xù)療效約為40?%，然而這兩種藥物副作用大和費用昂貴，限制了廣泛應用。隨著臨床上蛋白酶和逆轉錄酶抑制劑在治療HIV中的應用及取得的良好療效，近年來以在病毒基因組復制和多聚蛋白前體加工成熟中起著關鍵作用的酶類(如絲氨酸蛋白酶、解旋酶和RNA聚合酶)為靶標，尋找特異有效的治療藥物已經成為HCV防治研究的重要方向。

此外，目前HCV的主要診斷方法是用放射免疫診斷（RIA）或酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）檢測血清中HCV抗體，但是抗體檢測一般存在7～10周的窗口期，威脅著用血安全。檢測HCV核酸可有效縮短窗口期，但因其操作復雜，容易污染且價格昂貴，使之不能廣泛應用。血清學檢測中，除了抗體檢測，還有抗原檢測，可以縮短窗口期。早期診斷是控制HCV發(fā)生和傳播的重要手段。因此，獲得有效抗體，研究抗原檢測試劑成為目前HCV診斷研究的重要方向。

HCV屬于黃病毒科，肝病毒屬，單股正鏈RNA病毒。HCV的基因組大小約為9600bp，包括一個大的開放閱讀框（ORF）和兩側的5'、3'非編碼區(qū)（NCRs）。翻譯結束后，前體聚蛋白被宿主和病毒的蛋白酶共同切割成10個具有獨立功能的HCV蛋白，根據功能的不同命名為C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。其中HCV?NS3?蛋白全長?631?個氨基酸（aa），分子量約為?70kD，其?N?端的?189?個?aa?具有絲氨酸蛋白酶活性，C?端的?442?個?aa?具有核苷三磷酸酶（NTPase）和?RNA?解旋酶的活性。C端解旋酶分為三個區(qū)域，區(qū)域1和區(qū)域2是主要的功能區(qū)，并且序列保守性較高。其中，區(qū)域1中的Walker?A?（GSGKSTK）在HCV?所有亞型中高度保守，為ATP結合位點，并在解旋酶活性啟動中起到重要作用。NS3解旋酶的活性與?RNA的復制是分不開的，在HCV前體蛋白的成熟和病毒復制過程中發(fā)揮重要作用。由于HCV?NS3蛋白的多功能性和它在病毒基因組復制及蛋白前體加工成熟中的重要性，它已經成為抗HCV感染的理想靶位。

發(fā)明內容

本發(fā)明的一個目的在于提供一種丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位，也為丙型肝炎病毒NS3解旋酶ATP結合位點單克隆抗體識別表位。

本發(fā)明的另一個目的在于提供上述B細胞表位的應用。

本發(fā)明的另一個目的在于提供抗丙型肝炎病毒NS3蛋白的單克隆抗體，其能識別上述丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位。

本發(fā)明的再一個目的在于提供抗丙型肝炎病毒NS3蛋白的單克隆抗體的應用。

為解決以上問題，本發(fā)明采用的技術方案為：

丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位，具有如下所示的氨基酸序列：PTGSGKSTK（SEQ?ID?NO:1）。

上述的丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位在制備診斷、預防或治療丙型肝炎試劑或藥物中的應用。

一種抗丙型肝炎病毒NS3蛋白的單克隆抗體，其重鏈為IgG1、輕鏈為κ鏈，該單克隆抗體能與權利要求1所述的丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位特異性結合。

上述的單克隆抗體的制備方法，包括如下步驟：

1)??將權利要求1所述的丙型肝炎病毒NS3蛋白B細胞表位免疫動物；

2)??取免疫動物的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選陽性雜交瘤細胞株；

3)??以有限稀釋法克隆化培養(yǎng)陽性雜交瘤細胞株，獲得穩(wěn)定分泌抗丙型肝炎病毒NS3蛋白的陽性雜交瘤細胞；