[發明專利]一種高純度矢車菊色素的制備方法

有效

• 申請號: 201210242158.0
• 申請日: 2012-07-13
• 公開（公告）號: CN102746266A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 夏濤;蔣曉嵐;劉亞軍;楊琴;高麗萍
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;C09B61/00
• 代理公司: 合肥金安專利事務所 34114
• 代理人: 金惠貞

技術領域

本發明屬于天然產物化學領域，本發明涉及一種高純度矢車菊色素的制備方法。

背景技術

矢車菊色素是花青素類化合物中的一種，自然條件下游離態的矢車菊色素單體極少見,主要存在形式其糖苷形式，常與一個或多個葡萄糖(?glucose)、鼠李糖(?rhamnose)、半乳糖(?galactose)、木糖(?xylose)、阿拉伯糖(arabinose)?等通過糖苷鍵連接形成花青素糖苷。糖苷化的矢車菊色素廣泛存在于開花植物(?被子植物)?的花、果實、莖、葉、根器官的細胞液中,?分布于27?個科,?72?個屬的植物中，其中尤以葡萄皮、桑果、黑莓、藍莓、櫻桃、山楂、樹莓、紫甘藍等含量最為豐富。

矢車菊色素和其他種類花青素一樣，不僅是一種安全的天然食用紅色素，而且具有抗菌、抗衰老、降低癌癥和心血管疾病的發病率等重要的生理功能。花青素的主要作用在于清除自由基，許多與老年有關的疾病，如心臟病、癌癥、皺紋、眼睛疾病、帕金病和阿耳茨海默早老性癡呆癥等，均與由自由基引起的氧化作用有關。

目前國內外有關花青素的研究主要集中在花青素資源分布的評價與資源庫的建立、花青素的分析方法學研究、花青素的生理活性、天然花青素糖苷的高效提取與分離技術研究、花青素的結構穩定性與分子降解機制研究、花青素的應用與產品開發等6?個方面。現在市售95%純度的矢車菊色素單體為人民幣842.4元/毫克(http://www.sigmaaldrich.com/china-mainland.html)，尚無矢車菊色素單體制備的相關文獻報道。利用低成本茶樹根制取高純度的矢車菊色素單體具有很大的市場前景。

發明內容

本發明提供一種高純度矢車菊色素單體制備技術，以制備出高純度的矢車菊色素。

制備高純度矢車菊色素的具體操作步驟如下：

1.1、原花青素的提取

將20g新鮮的茶樹根放入勻漿機中，加入200毫升提取液，轉速1000轉/分鐘，勻漿5分鐘，收集勻漿液；溫度4℃、轉速5000轉/分鐘條件下，離心分離10分鐘，收集上清液，得原花青素溶液；所述提取液由70毫升丙酮加入29.5毫升水和0.5毫升乙酸制得；

1.2、原花青素的純化

原花青素溶液和純凈水按體積比1:10混合均勻，經AB-8大孔樹脂吸附，用1升濃度20%的甲醇洗脫，再用100毫升純甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，得原花青素粗品溶液；

1.3、矢車菊色素甲醇液的制取

原花青素粗品溶液和熱解溶液按體積1:10混合均勻，溫度95℃熱解1小時，得矢車菊色素熱解溶液；利用旋轉蒸發儀，溫度70℃水浴蒸發1小時，除去熱解溶液，殘留的干粉用10毫升純甲醇溶解，得矢車菊色素甲醇溶液；所述熱解溶液由95毫升正丁醇加入5毫升濃鹽酸中制得；

1.4、矢車菊色素的純化

矢車菊色素甲醇溶液、乙酸乙酯和純凈水按體積比1：2：2混合均勻，室溫下萃取，收集水相矢車菊色素溶液；水相矢車菊色素溶液和純凈水按體積比1:10混合均勻，經AB-8大孔樹脂吸附，用1升濃度20%的甲醇洗脫，再用100毫升純甲醇洗脫，收集紅色甲醇洗脫液，得矢車菊色素溶液；

1.5、矢車菊色素純品的制備

將矢車菊色素溶液加入旋轉蒸發儀，溫度40℃水浴蒸發10～30分鐘，待有沉淀析出，停止蒸發；加入濃鹽酸1毫升，混合均勻，4℃下放置1h，轉速5000轉/分鐘條件離心收集沉淀物，氮吹儀吹干沉淀物，獲得純度大于98%的矢車菊色素粉末；矢車菊色素粉末呈胭脂紅，難溶于水，易溶于甲醇溶液；

1.6、純化得矢車菊色素純品的高效液相色譜分析

利用高效液相色譜技術(HPLC)檢測純化得到的矢車菊色素的純度。

HPLC色譜條件：日本島津20AD高效液相色譜儀；色譜柱：菲羅門?圣潔蘭4u?輻深250*4.6毫米?(Phenomenex?Synergi?4u?Fusion?250*4.6mm)；檢測器：日本島津SPD6AV可調波長紫外檢測器；靈敏度：0.01；檢測波長：530?nm；流速：1.0?毫升?/?分鐘；進樣量：5微升；采用梯度洗脫條件A相：1%乙酸，B相：色譜純乙腈，洗脫梯度為前20?分鐘內A相由90%到87%，B相由10%到13%；20?分鐘到40分鐘?A相由87%到70%，B相由13%到30%。

本發明方法具有以下幾方面的優點：

1、自然條件下游離態的矢車菊色素單體極少見，本發明利用來源廣泛的茶樹根為原料，運用原花青素水解和純化技術制備高純度游離態矢車菊色素單體；