[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定高效的木薯種質(zhì)資源離體保存方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210241335.3 | 申請日： | 2012-07-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN102783415A | 公開（公告）日： | 2012-11-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 歐文軍;李開綿;李庚虎;陳松筆;葉劍秋 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 46001 | 代理人： | 劉清蓮 |
| 地址： | 57173*** | 國省代碼： | 海南;66 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 穩(wěn)定 高效 木薯 種質(zhì) 資源 保存 方法 | ||
1.一種穩(wěn)定高效的木薯種質(zhì)資源離體保存方法，其特征在于，包括離體保存材料的外植體消毒處理、無菌試管苗獲得和試管苗的繼代培養(yǎng)，其具體步驟如下：
1）、外植體消毒處理
在大田或?qū)嶒?yàn)室盆栽苗中，切取木薯帶芽嫩莖，除去葉片和部分葉柄后，用洗衣粉浸泡20min，接著用自來水沖洗20min，在超凈工作臺(tái)上先用濃度為75%酒精浸泡8s，再放入0.5%升汞溶液中浸泡10～15min，用無菌水沖洗4～5次；
2）、無菌試管苗獲得
將消毒后的嫩莖放在超凈工作臺(tái)上，切成單芽莖段，保留完整芽眼，并切除葉柄和莖段上、下端多余的部分，接種于以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加奈乙酸0.2mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂9g/L固體培養(yǎng)基上；培養(yǎng)基用1?mol/L的氫氧化鈉，調(diào)整pH值至5.8，在121℃滅菌20分鐘后即可；將消毒處理好的外植體接種于上述固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)數(shù)周后，獲得無菌試管苗；培養(yǎng)條件為25±2℃，3000xl光照強(qiáng)度，16h/8h光周期；
3）、試管苗的繼代培養(yǎng)
將經(jīng)初代培養(yǎng)方法獲得的無菌試管小苗，在超凈工作臺(tái)上用解剖刀剔除葉片后，把莖桿切成單芽莖段長1.2～1.5cm，其中每個(gè)莖段含有一個(gè)健壯的節(jié)，節(jié)上部分長0.4～0.5?cm，節(jié)下部分長0.8～1?cm，并將莖段形態(tài)學(xué)下端插入固體繼代培養(yǎng)基中；所述固體繼代培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加NAA?0.2mg/L?、Kana?80mg/L、蔗糖?30g/L、瓊脂?9g/L，pH?5.8；培養(yǎng)條件為25±2℃，3000xl光照強(qiáng)度，16h/8h光周期。
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