[發明專利]慶大霉素金標快速檢測條及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210238317.X
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102749451A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 唐慧林;何艷玲;王麗哲;于重楠;李瑾
• 申請（專利權）人: 北京陸橋技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫學領域，涉及快速檢測食品中氨基糖苷類抗生素慶大霉素殘留的試劑盒和方法。?

背景技術

自2008年以來，乳制品的安全問題在全國乃至全世界造成了巨大的影響，不僅廣大消費者的權益受到了損害，整個乳制品行業包括眾多的奶農的利益也受到了巨大損害。乳制品行業的食品安全問題已經嚴重關系到了我國的國計民生，急需解決。?

乳制品的安全，既需要從源頭開始，通過各項規章制度對質量進行層層控制，也需要各種檢測技術進行層層把關。由于乳制品生產涉及的原料數量巨大、來源眾多，因此如何實現對大量原料奶樣品準確快速的篩選，是目前檢測技術急需突破的難點之一。?

氨基糖苷類抗生素是奶牛常用藥物之一，包括鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素和卡那霉素等，此類藥物均具有耳毒性和腎臟毒性，能損害腦神經、耳蝸神經，輕者聽力下降，重者永久性耳聾，會對近端腎曲管有損害，造成血尿、腎功能衰退等。目前常用的檢測方法是液相色譜法、TTC法和酶聯免疫法，這三種方法均無法實現在現場的快速檢測，難以滿足目前逐漸增大的檢測樣本量，以及對奶源的現場檢測控制的需求。?

免疫層析測試技術是九十年代初發展起來的一項新技術，因其簡便（不需要任何設備）、快速、直觀、敏感、特異，在臨床診斷等諸多領域已得到廣泛應用，用于快速檢測血清或尿樣中的抗原成分；也可用于檢測樣品中的致病菌和其它有害成分等。該方法靈敏度高和特異性強，反應快速，操作簡便，不需任何特殊儀器設備，適用于快速篩查和現場檢測。?

發明內容

本發明解決的技術問題是提供食品中慶大霉素快速檢測條及其檢測方法和應用；發明主要目的在于克服傳統的檢測方法繁瑣，檢測耗時，在實際工作中應用局限性大等缺陷，而提供一種更加快速、簡捷、安全的檢測試劑盒及其檢測方法。?

食品中慶大霉素金標快速檢測條，所述檢測條由樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊順次搭接黏貼在底襯上，在樣品墊處貼上MAX線。金標抗體結合墊上包被膠體金顆粒標記的慶大霉素單克隆抗體，硝酸纖維素膜上包被有檢測線和控制線，所述檢測線中含有慶大霉素-蛋白偶聯物，所述控制線內放置有羊抗鼠單克隆?抗體。?

所述蛋白偶聯物是牛血清白蛋白；?

結合墊上包被的膠體金顆粒直徑為25nm，1mL膠體金顆粒標記慶大霉素單克隆抗體的量為3ng，形成膠體金-抗體復合物，在結合點墊上膠體金顆粒的包被量為2mL/30cm。?

所述檢測線上慶大霉素-蛋白偶聯物的包被量為1μL/cm；?

控制線上羊抗鼠抗體包被量為1μL/cm；?

羊抗鼠抗體濃度為1mg/mL；?

一種慶大霉素金標快速檢測條的制備方法闡述如下：?

1）金標抗體結合墊的制備?

a.空白膠體金溶液的制備：?

采用檸檬酸鹽還原法制備膠體金顆粒，在三角燒瓶中加入97.5ml雙蒸水加熱至沸騰后加入1.5ml檸檬酸三鈉，繼續加熱5min后加入1ml?1%氯金酸，持續加熱煮沸至液體呈現桔紅色，保持沸騰狀態10min后將燒瓶置于室溫，充分冷卻后，冷藏保存；?

b.膠體金標記抗體的制備：?

取空白膠體金溶液100ml，加入0.1M碳酸鉀150～200ul來調節溶液的pH值。在磁力攪拌下逐滴加入濃度為0.2mg/ml的慶大霉素單克隆抗體，使終濃度為3ng/ml，繼續攪拌30min，12000轉/分鐘離心30分鐘后，吸除上清，用金標抗體重懸液將沉淀金標抗體充分重懸；

c.金標抗體結合墊的制備：?

將重懸好的金標抗體包被于預先切割好的尺寸為1cmX30cm的玻璃纖維素膜上，包被量為2ml/30cm，37℃干燥過夜，取出自封袋密封避光干燥處保存；?

2）硝酸纖維素膜上T、C線的包被?

a.慶大霉素-蛋白偶聯物的制備?

稱取40mg慶大霉素硫酸鹽和10mg牛血清白蛋白（BSA），分別溶解于1ml的蒸餾水中，將BSA溶液逐滴加入到慶大霉素溶液中，室溫下于磁力攪拌器上攪拌2h以上。取120mg?EDC.HCl溶于1ml蒸餾水中，再逐滴加入到上述溶液中，在室溫下繼續攪拌1h以上，然后于4℃放置過夜。用PBS透析3天后，分裝，-20℃貯存。?

b.T、C線的包被?

調試好二維噴點平臺，將合適濃度的慶大霉素蛋白偶聯物通過劃線的方式包被在?硝酸纖維素膜上作為檢測線，同時進行羊抗鼠單克隆抗體的包被作為控制線，37℃干燥2h，密封，避光干燥處保存；?

3）試紙條的組裝?