[發(fā)明專利]正紅菇菌根型食用菌的分離培養(yǎng)保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210238171.9
• 申請(qǐng)日: 2012-07-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102715016A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳羽;仲崇祿;姜清彬;張勇;陳珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬(wàn)志香

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及共生微生物培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種正紅菇菌根型食用菌的分離培養(yǎng)保存方法。

背景技術(shù)

菌根型食用菌指一些在其自身的生活史中，必須依賴于一些活的樹(shù)木根系，并與樹(shù)木根系形成共生關(guān)系的一類食用菌。菌根食用菌與樹(shù)木根系之間的營(yíng)養(yǎng)生理過(guò)程首先形成共生體-菌根，才能完成物質(zhì)交換的相互依賴關(guān)系。我國(guó)已知的567年野生食用菌資源中，屬于菌根型食用菌的資源就已知有352種，約占國(guó)產(chǎn)食用菌資源總量的53.6％。許多種類的菌根型食用菌都具有較高的經(jīng)濟(jì)和營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)它們對(duì)森林的持續(xù)發(fā)展也具有重要的意義。

正紅菇是目前僅知分布在中國(guó)部分地區(qū)的紅菇屬新種，是一種與殼斗科樹(shù)種共生的菌根型食用菌。正紅菇具養(yǎng)血、逐瘀、祛風(fēng)，主治血虛萎黃、產(chǎn)后惡露不盡、關(guān)節(jié)酸痛等功能，它不僅美味，更是營(yíng)養(yǎng)保健的野生菇，在中國(guó)及東南亞部分地區(qū)深受人們喜愛(ài)。由于其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能，正紅菇的價(jià)值甚至超過(guò)世界某種的松茸、美味牛肝菌和松乳菇。

正紅菇做為一種珍貴的藥食兩用菌，不僅具有良好的色澤和風(fēng)味，并且具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、補(bǔ)血、降低血液膽固醇等藥用功能。近年來(lái)，隨著生活水平的提高，人們的飲食要求已經(jīng)由原來(lái)的滿足溫飽轉(zhuǎn)變?yōu)樽非蠼】岛统缟刑烊弧＿@無(wú)疑為開(kāi)發(fā)利用紅菇資源提供了廣闊的市場(chǎng)前景。

菌根菌普遍都較難分離培養(yǎng)，亦較難保存，目前國(guó)際上菌根菌一般每隔3個(gè)月左右轉(zhuǎn)管一次，且菌種的活性也易退化。

目前，正紅菇菌絲體分離培養(yǎng)一般取材于子實(shí)體的菇蓋或菇柄的菌肉，分離培養(yǎng)所取的子實(shí)體均為未成熟或有7分成熟，菌傘均未打開(kāi)，分離成功的概率較少或幾乎沒(méi)有萌發(fā)；分離所用的子實(shí)體材料均用升汞溶液或酒精進(jìn)行表面消毒；分離培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基均為PDA培養(yǎng)基或改良的PDA培養(yǎng)基；正紅菇分離培養(yǎng)、純化及保存均采用PDA培養(yǎng)基，試管種的活性一般為3個(gè)月(黃年來(lái)等，2010；陳旭健等，2005；陳少珍等，2004)。從事食用菌研究的科研人員，普遍都深感正紅菇的分離培養(yǎng)萌發(fā)率低，純化成功率低，菌種保存時(shí)間較難持久，菌種的活性消失較快。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種分離培養(yǎng)成功率高、菌種保存時(shí)間長(zhǎng)、活性持久的正紅菇菌根型食用菌分離培養(yǎng)保存方法。

一種正紅菇菌根型食用菌的分離培養(yǎng)保存方法，包括以下步驟：

a、摘采正開(kāi)傘的成熟正紅菇子實(shí)體；

b、在無(wú)菌條件下取步驟a中正紅菇子實(shí)體菌柄與菌蓋交接處的菌褶部分的組織塊，放入含乳糖、維生素B₁和葉酸的改良PDA固體培養(yǎng)基中，室溫、避光培養(yǎng)3～5天，萌發(fā)得到菌絲體；

c、在無(wú)菌條件下將步驟b中的菌絲體放入含乳糖的改良MN固體培養(yǎng)基中，室溫、避光培養(yǎng)5～7天，純化菌絲體；

d、在無(wú)菌條件下，將步驟c中純化的菌絲體轉(zhuǎn)接入具膠蓋的試管中，25～30℃、避光培養(yǎng)5～7天，所述試管中裝有由步驟b所述的含乳糖、維生素B1和葉酸的改良PDA培養(yǎng)基和步驟c所述的含乳糖的改良MN培養(yǎng)基組成的混合培養(yǎng)基；

e、將步驟d中無(wú)污染的試管置于10～15℃保存。

在其中一些實(shí)施例中，步驟b的培養(yǎng)基中所述乳糖的濃度為4～6g/L。

在其中一些實(shí)施例中，步驟c的培養(yǎng)基中所述乳糖的濃度為0.5～1.5g/L。

在其中一些實(shí)施例中，步驟d中所述含乳糖、維生素B₁和葉酸的改良PDA培養(yǎng)基與含乳糖的改良MN培養(yǎng)基的體積比為1∶1～2∶1。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟d中所述含乳糖、維生素B₁和葉酸的改良PDA培養(yǎng)基與含乳糖的改良MN培養(yǎng)基的體積比為2∶1。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟e中所述試管與膠蓋之間的銜接口用保鮮膜封包。

本發(fā)明正紅菇菌根型食用菌的分離培養(yǎng)保存方法，組織塊菌絲體的萌發(fā)率高達(dá)50％以上，菌種保存時(shí)間一次分轉(zhuǎn)可達(dá)1年，菌種活性持續(xù)3年不退化。

本發(fā)明方法不需要消毒子實(shí)體，配制培養(yǎng)基所用試劑均是常用品，整個(gè)操作過(guò)程較簡(jiǎn)練，使正紅菇菌根食用菌的菌種分離培養(yǎng)保存方法簡(jiǎn)便化，為菌根食用菌行業(yè)提供了新的操作方法和技術(shù)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。

實(shí)施例1

一種正紅菇菌根型食用菌的分離培養(yǎng)保存方法，其步驟如下：

(1)配制含葉酸、維生素B₁和乳糖的改良PDA培養(yǎng)基。