[發明專利]一種制備細胞外基質支架材料的脫細胞方法

有效

• 申請號: 201210237911.7
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN103536967A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 董教明;李雨;陳大凱;陳葉萌;王靜;穆元姍;房圓;陳國明;張曉怡;樂承筠;羅七一
• 申請（專利權）人: 上海微創醫療器械（集團）有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 楊青;穆德駿

1.一種制備細胞外基質支架材料的脫細胞方法，包括以下步驟：

a.對待用組織器官進行預處理；

b.將經過預處理的待用組織器官加入到含有吡喃葡萄糖苷的溶液中，通過低滲溶液振蕩處理；

c.將步驟b處理后的組織器官加入到含有核酸酶的溶液中；以及

d.洗滌制備的細胞外基質支架材料。

2.權利要求1的方法，其中所述的待用組織器官為異種或同種異體或自體組織器官，選自牛心包、豬心包、心臟瓣膜、皮膚、血管、小腸粘膜下層、神經中的任意一種。

3.權利要求1或2的方法，其中所述的預處理是使用含有抗生素的生理鹽水，或pH值為6.8-8.6的磷酸鹽緩沖液，或pH值為6.8-8.6的D-Hanks溶液，在0-37℃條件下對待用的組織器官進行常規清洗、消毒、分離。

4.前述權利要求任一項的方法，其中所述的吡喃葡萄糖苷選自n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(OGP)、辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷、壬基吡喃葡萄糖苷、癸基吡喃葡萄糖苷、十二烷基吡喃葡萄糖苷的任一種或其組合，優選OGP。

5.前述權利要求任一項的方法，其中所述的吡喃葡萄糖苷濃度小于70%(w/v)，優選0.1-10%(w/v)，更優選0.5-5%(w/v)，含有吡喃葡萄糖苷的溶液的溫度范圍為1℃-40℃，優選3℃-8℃，含有吡喃葡萄糖苷的溶液的pH值范圍為5-12，優選6.8-8.6，處理時間為30分鐘-96小時，優選6-48小時。

6.前述權利要求任一項的方法，其中所述的低滲溶液振蕩處理是采用無菌的0.01M?Tris-HCl緩沖液(pH6.8-8.6)，在1℃-40℃(優選3℃-8℃)中振蕩處理30分鐘-96小時，優選6-48小時，振蕩速率為50-360rpm，優選為100-250rpm。

7.前述權利要求任一項的方法，其中所述的核酸酶溶液的配制是在含有0.15M氯化鈉和1-5mM氯化鎂的無菌的0.02-0.05M?Tris-HCl緩沖液(pH6.8-8.6)中加入100-10000u/ml(優選1000-8000u/ml)的脫氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶(RNase)，在37℃環境中60-360rpm(優選100-250rpm)轉速下振蕩處理12-72小時。

8.前述權利要求任一項的方法，其中所述的洗滌是使用含有抗生素的生理鹽水，或pH值為6.8-8.6的磷酸鹽緩沖液，或pH值為6.8-8.6的D-Hanks溶液，在1℃-25℃條件下對所得的脫細胞基質進行常規清洗，清洗時間為6-48小時。