[發明專利]依賴納米粒子包裹GM-CSF的緩釋型肝癌細胞疫苗

有效

• 申請號: 201210236543.4
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102743745A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 孫倍成;陳晨;侯嘉杰;王學浩
• 申請（專利權）人: 孫倍成;王學浩
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K47/36;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

技術領域

本發明涉及肝癌細胞疫苗領域，具體涉及一種依賴納米粒子包裹GM-CSF的緩釋型肝癌細胞疫苗。

背景技術

腫瘤免疫治療是新興的腫瘤治療方法，在腫瘤綜合治療中具有較高的地位，而腫瘤疫苗是腫瘤免疫治療的重要組成部分。腫瘤細胞疫苗在腫瘤疫苗中研究最早，應用也最為廣泛，其臨床應用前景及市場潛力相當之大。

GVAX疫苗，即可分泌GM-CSF的滅活全腫瘤細胞疫苗，是目前應用較為廣泛的腫瘤細胞疫苗。粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte?macrophage?colony?stimulating?factor，GM-CSF)是一種強烈刺激巨噬細胞和樹突狀細胞等抗原遞呈細胞增殖、分化和成熟的細胞因子（圖1）。20世紀90年代初，Dranoff及Jaffee等比較了各類細胞因子在腫瘤細胞疫苗應用中免疫活性的差異。他們利用小鼠黑色素瘤細胞系B16構建出表達并分泌不同細胞因子或趨化因子的黑色素瘤細胞疫苗，照射之后免疫荷瘤小鼠，結果發現分泌GM-CSF的腫瘤疫苗抗腫瘤活性最強。GVAX疫苗經γ射線滅活后通過局部注射到達體內，分泌產生的GM-CSF可募集大量巨噬細胞和樹突狀細胞(dendritic?cells，DC)，這些抗原遞呈細胞能吞噬注射局部的腫瘤細胞，在GM-CSF作用下活化、成熟、遷移，并將腫瘤細胞攜帶的腫瘤相關抗原和腫瘤特異性抗原進行處理、遞呈，最終誘導產生殺傷腫瘤的特異性活化T淋巴細胞。

眾多臨床研究者在上述研究的基礎上開展了臨床試驗，進一步表明了GVAX疫苗在臨床應用中的積極意義。早期的研究者將GM-CSF基因直接導入自體腫瘤細胞，制成能夠自分泌GM-CSF的腫瘤細胞，再將這些細胞經照射處理制成細胞疫苗接種人體。一項研究結果顯示，在25例非小細胞肺癌患者中，18例腫瘤患者完成接種GVAX疫苗的全部療程并產生陽性反應，其中2例患者治療后以無腫瘤狀態生存超過2年，另3例患者分別在治療后4、8和15個月未發現腫瘤惡化的跡象，使疾病得以控制。另一項關于前列腺癌的研究顯示，55例激素治療失敗的患者接種不同劑量的GM-CSF基因轉染的異基因腫瘤疫苗后，高劑量組的中位生存期和骨轉移病灶進展期均明顯比低劑量組長。然而有研究者稱，由于腫瘤細胞的自身缺陷，GM-CSF的表達水平可受到限制，只有當腫瘤部位在數天之內維持>40ng/10⁶/24h的GM-CSF分泌濃度，機體對腫瘤才能表現出較強的免疫反應，患者的生存時間才會得到明顯的延長。在白血病相關研究中，Smith等使用K562（慢性粒細胞白血病細胞系）制備旁分泌GM-CSF的bystander細胞，實驗證明這種旁分泌途徑產生的GM-CSF量明顯高于自體腫瘤細胞。將其與自體白血病細胞混合成新型GVAX疫苗應用于AML（急性髓細胞性白血病）自體干細胞移植后的緩解治療：54例患者參與了該項研究，有46例患者經治療后獲得了完全緩解，3年無復發生存率(relapse?free?survival?rate，RFS)為47．4%，總體生存期(over—all?survival，OS)為57.4％?；而在預先接受GVAX免疫的28例患者中，RFS和OS分別為61.8%和73.4%。

GVAX疫苗在美國對前列腺癌、肺癌、胰腺癌及白血病的研究許多已進入III期臨床試驗，研究結果均證實這種新型GVAX疫苗安全性比早期腫瘤疫苗效果好，不良反應液較少，如注射部位瘙癢、紅斑和水腫等局部反應以及一過性流感樣癥狀，這點和其它疫苗的不良反應類似。GVAX疫苗國內尚未開展臨床應用。目前我國對生物治療的管理尚不完善，迄今為止明確的相關規定只有1993年衛生部頒布的“人的體細胞治療申報臨床試驗指導原則”，但作為新興的治療腫瘤的方法，而且又是具有高科技含量的新興產業，國家相關的相關政策一直是以積極扶持為主。

雖然目前GVAX腫瘤疫苗技術顯現出了較好的臨床應用前景，但同時也存在著一些缺陷及隱患。

1）??以滅活的腫瘤細胞作為GM-CSF的載體，其分泌量較不穩定，我們研究發現B78H1-GM-CSF細胞系的GM-CSF分泌量從幾十至數千ng/10⁶/24h不等，且有文獻報道稱當GM-CSF超過1000ng/10⁶/24h時反而會募集骨髓抑制性細胞抑制免疫應答，故無法對病人進行標準化應用。