[發(fā)明專(zhuān)利]一種產(chǎn)胞外多糖的菠蘿泛菌及其多糖的提取和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210235751.2
• 申請(qǐng)日: 2012-07-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103255075A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓蓓;張瑞娟;李衛(wèi)敏;王培培;梁歡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61P1/00;A61P31/00;A61P39/06;C12R1/01
• 代理公司: 西安通大專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 陸萬(wàn)壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于產(chǎn)胞外多糖的微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種產(chǎn)胞外多糖的菠蘿泛菌及其多糖的提取和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

多糖的抗氧化作用已經(jīng)成為最為活躍的研究課題之一。通常植物和藻類(lèi)來(lái)源的多糖較為普遍，但近些年來(lái)，微生物來(lái)源的多糖（胞外多糖）引起廣泛關(guān)注，尤其是細(xì)菌和真菌來(lái)源的胞外多糖，因其易于分離純化而且產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)在工業(yè)生產(chǎn)中頗受青睞。?

胞外多糖(Exopolysaccharide，EPS)是細(xì)菌細(xì)胞外含糖結(jié)構(gòu)的總稱(chēng)，包括革蘭氏陰性細(xì)菌胞膜外的多糖成分和革蘭氏陽(yáng)性菌得肽聚糖，是細(xì)菌在特定環(huán)境調(diào)節(jié)下產(chǎn)生的高分子物質(zhì)。作為細(xì)菌的次生代謝產(chǎn)物，胞外多糖對(duì)細(xì)菌的作用主要有：使細(xì)菌群集抵抗吞噬；保護(hù)細(xì)菌不和抗體結(jié)合；形成群集內(nèi)細(xì)菌交替性生長(zhǎng)；幫助細(xì)菌群體向周?chē)@得足夠營(yíng)養(yǎng)。作為與人類(lèi)生活緊密相關(guān)的一類(lèi)生物高分子，近年的研究發(fā)現(xiàn)細(xì)菌胞外多糖還具有抗氧化、抗輻射、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、降血脂，以及抗腫瘤、抗肝炎病毒等特殊的生物學(xué)活性。?

近年來(lái)，微生物多糖抗氧化活性的研究報(bào)道很多，其在體外可以清除自由基，還具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化的能力；在體內(nèi)則可以提高抗氧化酶的活性，也表現(xiàn)出抗脂質(zhì)過(guò)氧化的能力。與其他外源性抗氧化劑相比，抗氧化多糖具有低毒、安全來(lái)源廣等特點(diǎn)。作為外源性抗氧化劑，多糖在生物體內(nèi)發(fā)揮作用更為復(fù)雜，它可直接參與淬滅自由基的途徑外，還可能與通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)內(nèi)源性抗氧化劑的活性相關(guān)。另外多糖可以作為一種天然的生物抗氧化劑進(jìn)行復(fù)配，增強(qiáng)對(duì)人體健康的保護(hù)作用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的問(wèn)題在于提供一種產(chǎn)胞外多糖的菠蘿泛菌及其多糖的提取和應(yīng)用，該菠蘿泛菌是一種新的微生物，其分泌的胞外多糖具有抗氧化活性。?

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：?

一種產(chǎn)胞外多糖的菠蘿泛菌，其分類(lèi)命名為Pantoea?ananatis?G-14，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏號(hào)為CCTCC?M2010107。?

所述的產(chǎn)胞外多糖的菠蘿泛菌在生長(zhǎng)過(guò)程中向胞外分泌多糖。?

所述的多糖具有抗氧化活性。?

基于Pantoea?ananatis?G-14發(fā)酵培養(yǎng)提取胞外多糖的方法，包括以下步驟：?

1）將P.ananatis?G-14單菌落接種在LB液體培養(yǎng)基中，于25～30℃下，攪拌，通氣培養(yǎng)8～10h；然后轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25～30℃下，攪拌，通氣培養(yǎng)48～65h；?

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是在LB液體培養(yǎng)基中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1～5%的單糖或雙糖作為附加碳源；?

2）培養(yǎng)完成后，離心，收集培養(yǎng)液上清；?

3）將培養(yǎng)液上清濃縮后，加入其體積2～5倍的體積分?jǐn)?shù)80～95%的乙醇溶液，充分混勻，0～10℃下靜置12～24h后，收集靜置后的沉淀，得到粗多糖；?

4）分離去除粗多糖中的蛋白后，在截留分子量為8000～14000的透析袋中以滅菌純水緩沖液透析24h以上，每12小時(shí)更換1次緩沖液；?

將透析袋中的多糖溶液低溫冷凍干燥獲得胞外多糖干粉。?

所述的步驟1）是將P.ananatis?G-14單菌落接種在LB液體培養(yǎng)基中，于25～30℃下，100～300rpm攪拌，通氣培養(yǎng)8～10h；然后以1～5%的接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25～30℃下，攪拌，通氣培養(yǎng)48～65h；?

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基是在LB液體培養(yǎng)基中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1～5%的葡萄糖?作為附加碳源。?

所述的步驟2）的離心為8000～12000rpm，3～10min，4℃離心收集培養(yǎng)液上清。?

所述的步驟3）為：將培養(yǎng)液上清減壓濃縮至原體積的1/5～1/10，然后加入其體積2～5倍的體積分?jǐn)?shù)80～95%、4℃預(yù)冷的乙醇溶液，充分混勻，0～4℃下放置12～24h后使胞外多糖充分沉淀；?

8000～12000rpm，3～10min，4℃離心收集沉淀，得到粗多糖。?

所述的步驟4）為：粗多糖采用Sevage法除蛋白后，離心取上清，在截留分子量為8000～14000的透析袋中在滅菌純水中透析48小時(shí)，每12小時(shí)更換1次緩沖液；?

將透析袋中的多糖溶液在使用冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，冷凝溫度<-50℃，真空度<20Pa，冷凍時(shí)間為18～24h，獲得胞外多糖干粉。?

Pantoea?ananatis?G-14發(fā)酵培養(yǎng)分泌的胞外多糖在制備抗氧化劑的應(yīng)用。?

所述的抗氧化劑為：?