[發(fā)明專(zhuān)利]一種同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林殘留的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210234303.0
• 申請(qǐng)日: 2012-07-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102706991A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝愷舟;賈龍飛;陳學(xué)森;張小杰;謝星;孫瑛瑛;李?lèi)?ài)華;趙敏;張跟喜;戴國(guó)俊;王金玉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林殘留的方法。

背景技術(shù)

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林的殘留檢測(cè)方法雖然有不少報(bào)道，主要有HPLC/UV法、HPLC/FLD法和HPLC-MS/MS法。HPLC/UV法樣品雜質(zhì)峰較多，干擾較大，對(duì)樣品的凈化要求較高，而且紫外檢測(cè)器的靈敏度較低。HPLC/FLD法靈敏度高，樣品雜質(zhì)峰較少，對(duì)樣品的凈化要求較低，但阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林本身無(wú)熒光吸收，樣品需進(jìn)行衍生化處理，且衍生化后四種藥物色譜峰無(wú)法有效分離。但到目前為止，國(guó)內(nèi)外同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）法的研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。申請(qǐng)?zhí)枮?011101751979的中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了一種用HPLC/FLD法同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林和氨芐西林的方法，但是該方法不能同時(shí)檢測(cè)并確證阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林在雞蛋中的殘留，并滿(mǎn)足歐盟標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了能同時(shí)檢測(cè)并確證阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林在雞蛋中的殘留，滿(mǎn)足歐盟標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明提供了一種高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS），能同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林的殘留。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種同時(shí)檢測(cè)雞蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨芐西林殘留的方法，是將雞蛋樣品經(jīng)過(guò)提取、凈化后，以乙腈-0.1%甲酸為流動(dòng)相,采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）檢測(cè)。

液相色譜條件：色譜柱：Agilent?C₁₈，5μm，150mm×4.6mm?i.d.；保護(hù)柱：C₁₈柱，5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸，分離AMO、AMA、DIKETO和AMP的梯度洗脫程序見(jiàn)表1；流速：1.0mL·min^-1；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：20μL。

表1分離AMO、AMA、DIKETO和AMP的梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件為：離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；電噴霧毛細(xì)管電壓：4000V；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速：10L·min^-1；霧化器氣體壓力：15psi；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：7L·min^-1；二級(jí)碰撞氣：氮?dú)狻MO、AMA、DIKETO、AMP和PV的保留時(shí)間和優(yōu)化質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

表2AMO，AMA，DIKETO，AMP和PV的保留時(shí)間和優(yōu)化質(zhì)譜條件

注:*定量離子

本發(fā)明中雞蛋樣品中阿莫西林和氨芐西林的提取、萃取和凈化推薦使用乙腈提取，用二氯甲烷萃取凈化。具體操作是：將雞蛋制成勻漿后，加入PV（青霉素V）內(nèi)標(biāo)溶液，然后加入乙腈溶液中混勻，離心，將上清液移出，加入1mL乙酸銨溶液（pH6.7），置漩渦混合器上混勻，再用經(jīng)超純水飽和的二氯甲烷萃取，離心，將上層水相轉(zhuǎn)移至玻璃離心管中，最后用氮吹儀吹干。上機(jī)前殘?jiān)?.0mL2%乙腈分兩次漩渦振蕩溶解，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中；12100×g離心15min，上清液經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，濾液供HPLC-MS/MS測(cè)定。

本發(fā)明采用HPLC-MS/MS法、與HPLC/FLD法相比，能進(jìn)行確證分析，能同時(shí)檢測(cè)雞蛋中的阿莫西林及其代謝產(chǎn)物（阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林）和氨芐西林，靈敏度高。

附圖說(shuō)明

圖1雞蛋中AMO的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖2雞蛋中AMA的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖3雞蛋中DIKETO的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖4雞蛋中AMP的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖5是空白雞蛋樣品離子色譜圖。

圖6是基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品離子色譜圖。

圖7是添加雞蛋樣品離子色譜圖。

圖8AMO的子離子掃描圖。

圖9AMA的子離子掃描圖。

圖10DIKETO的子離子掃描圖。

圖11AMP的子離子掃描圖。

圖12PV的子離子掃描圖。

具體實(shí)施方式

在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非有另外說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。