[發明專利]用于檢測丙型肝炎患者IL28B SNP12980275多態性的試劑盒無效

申請號：	201210234084.6	申請日：	2012-07-06
公開（公告）號：	CN102816838A	公開（公告）日：	2012-12-12
發明（設計）人：	李文靜;徐建成;王淑一;孫翠蓮	申請（專利權）人：	吉林艾迪康醫學檢驗所有限公司
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68
代理公司：	浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100	代理人：	黎雙華
地址：	130033 吉林省長***	國省代碼：	吉林;22
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摘要：
搜索關鍵詞：	用于檢測肝炎患者 il28b snp12980275 多態性試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別是一種臨床檢驗用途的基因檢測試劑盒，采用基因測序技術，對IL28B?SNP?rs12980275多態性位點進行檢測，可以用于預測丙型肝炎患者抗病毒治療效果。?

背景技術

丙型肝炎是一種由丙型肝炎病毒（hepatitis?C?virus，HCV）引起的肝臟急慢性炎癥，自從1989年被美國發現以來，HCV感染逐漸成為一個世界性公衛生問題。我國感染者約有4200萬人，每年的新發病例約300-400萬。80%感染者會發展成慢性肝炎，30%進展為終末期肝病，包括肝硬化、肝癌等。目前臨床上主要是應用干擾素合用利巴韋林來進行丙肝的治療，但是這種聯合治療方案，不同的病人對這種聯合治療應答的效果差異很大。?

IL28B基因編碼IFN-λ3，為Ⅲ型干擾素，位于19號染色體上，包含6個外顯子，屬于IFN-λs家族。IFN-λ主要是通過JAK-STAT信號途徑，誘導STAT1和STAT2的磷酸化,使ISGF3復合物產生，而且使2'，5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-oligoadenylatesynthetase,OAS)基因家族和MxA(也稱Mx1)蛋白的表達明顯提高，從而其抗病毒效應才發揮出來。2009年，美國杜克大學Goldstein等研究發現，編碼IFNλ3的IL28B基因附近有一些單核苷酸多態性(SNP)位點與HCV病毒自發清除能力及對干擾素的應答有關。當這些等位基因發生突變后，患者的丙肝病毒自發清除和對干擾素應答能力發生明顯變化。?

近期在歐洲人群和非洲人群之間進行的針對1型丙型肝炎基因組范圍相關性研究中發現，其單核苷酸多態性（SNP）位點rs12979860，rs12980275，rs8099917等的變異與病毒的清除和干擾素治療的應答高度相關，而位于IL28B基因下游3kb位置上的rs12980275位點和治療無應答(NVR)也密切相關。有報道指出IL28B?SNP位點rs12980275基因型為AA的患者的持續病毒學應答（sustained?virological?response，SVR）百分比明顯高于GG基因型患者。通過研究rs12980275位點的基因多態性，從而進一步完善臨床對患者的丙肝病毒自發清除能力及丙型肝炎治療效果的評估。?

目前可用SNP多態性檢測的方法有限制性片段長度多態性（sscp）,基因測序，熒光定量PCR等，sscp技術相對簡單，但酶切位點易受基因變異影響，影響結果判斷。本發明考慮到節約成本及時間等因素，選用基因測序法檢測IL28B基因多態性位點rs12980275。?

發明內容

本發明的目的在于，提供一種用于檢測丙型肝炎患者IL28B?SNP12980275多態性的試劑盒，可用于檢測rs12980275位點是否發生突變。?

用于檢測丙型肝炎患者IL28B?SNP12980275多態性的試劑盒，包括紅細胞裂解液、DNA提取液、檢測體系PCR反應液,其特征在于：?

檢測體系PCR反應液包括dNTP，用于PCR反應的Tag酶及其緩沖反應液、檢測IL28Brs12980275多態性用上下游引物，其中，?

IL28B上游引物序列：GTAGGGGGAATCATACAGCATT?

IL28B下游引物序列：GAGAGTTCTGGAGATTGCTTGC。?

進一步地，所述試劑盒的使用方法包括如下步驟：?

(i)采集待測血液樣本，提取DNA；?

(ii)以該DNA為模板，用IL28B上游引物和下游引物進行PCR擴增，得到PCR反應產物；?

(ⅲ)對PCR反應產物測序，與IL28B正常基因序列進行比較，確定是否存在突變位點。?

優選地，步驟(ii)的PCR反應按以下條件進行擴增：94℃5min；98℃10s、58℃20s、68℃2min、40個循環。?