[發明專利]一種HCV多表位肽疫苗及其應用

有效

• 申請號: 201210233754.2
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN102757484A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 徐志凱;黃小軍;呂欣;尹文;雷迎峰;楊敬;姚敏;賈戰生;張瑞國;蘭海云;張建敏
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;A61K39/29;A61P31/14
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于HCV疫苗技術領域，涉及一種HCV多表位肽疫苗及其應用。

背景技術

丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus,HCV)，為黃病毒屬的單股正鏈嗜肝RNA病毒，是引發慢性肝病的主要病原體，全球約有1.7億感染者，發病人數以每年三百萬速度遞增。慢性HCV感染與肝硬化和肝癌直接相關，嚴重影響患者生活質量。由于HCV標準治療方案費用高昂，療效不理想使得發展中國家大多數HCV感染患者難以承受。因此研發HCV疫苗成為降低HCV所引發的肝硬化，肝癌發生率最為有效的策略之一。

HCV基因組分別編碼核心蛋白C，包膜蛋白E1、E2，p7和6種非結構蛋白(NS2、NS3，NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。但由于HCV病毒RNA聚合酶缺乏校對功能，病毒變異率高，尤其是位于包膜糖蛋白E2的中和抗原位點存在高變區，傳統的以產生保護性抗體為主的疫苗研發面臨重重困難。

研究表明，急性病患體內多特異性CTL可以使病情逐漸轉歸、自愈。慢性HCV病人T細胞應答雖然具有多克隆以及多特異性，但強度遠不如急性病人的免疫應答強烈，相對較弱的抗HCV免疫應答導致病毒難以被清除。與此同時，肝內大量的HCV特異性CD8⁺T細胞分泌γ干擾素的水平受到抑制，因此，慢性HCV感染時CD8⁺T細胞功能障礙是造成免疫系統不能控制HCV復制，導致疾病慢性化的主要原因。

近10年來，對HCV感染發病機制、保護性免疫應答和病毒持續感染機制的認識取得了較大進展。中和抗體以及CD4⁺和CD8⁺T細胞所引發強烈的T細胞免疫應答已被證明與HCV的清除相關，這將是研制丙型肝炎疫苗的希望所在。

大量證據表明，HCV非結構蛋白介導的持續性、強烈的、多特異性的Th1型細胞免疫應答水平直接關系到病毒是否能被清除以及疾病的預后。由于大多數慢性患者HCV亞型的差異，成功的疫苗應該誘導產生強烈的多特異性免疫應答，包括CD4⁺及CD8⁺T細胞免疫應答。因此，HCV表位疫苗更傾向于選取保守區域。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種HCV多表位肽疫苗及其應用，將HCV多表位肽連接可以誘導出特異性的T細胞免疫應答，包括CD4⁺T細胞和CD8⁺T細胞，T細胞經過特異性抗原刺激以后可迅速產生IFN-γ和IL-2。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種丙型肝炎病毒的多表位多肽，包括以下多表位多肽：

其氨基酸殘基序列如SEQ.ID.NO.1所示；

或者其氨基酸殘基序列如SEQ.ID.NO.2所示。

所述的丙型肝炎病毒的多表位多肽在制備針對丙型肝炎病毒的預防性/治療性疫苗的應用。

所述的丙型肝炎病毒的多表位多肽在制備抗丙型肝炎病毒的藥物的應用。

所述的藥物為刺激CD4⁺T、CD8⁺T淋巴細胞增殖的藥物。

所述的藥物為刺激分泌IFN-γ和IL-2的細胞增殖的藥物。

所述的藥物為誘發針對丙型肝炎病毒的細胞免疫應答的藥物。

與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果：

本發明提供的丙型肝炎病毒的多表位多肽，篩選出的2個HCV保守CTL表位，進一步為了使所設計的疫苗可以刺激CD4⁺和CD8⁺T細胞，引發強烈的T細胞免疫應答，特將2個CTL表位輔以一個Th表位進行串聯。在保證各自獨立性的基礎上，該多表位多肽表現出了強的免疫原性，表現出了良好的免疫效果包括：

刺激淋巴細胞增殖、不僅可以刺激CD4⁺T、CD8⁺T淋巴細胞的增殖，而且可以刺激較高比例的CD8⁺T淋巴細胞增殖；

可以誘導出特異性的T細胞免疫應答；

經過特異性抗原刺激以后可以迅速產生IFN-γ和IL-2；

該HCV多表位多肽疫苗可能是較理想的HCV預防/治療性候選疫苗。

通過體外試驗，所構建的多肽疫苗可以刺激10例中的3例慢性丙型肝炎病毒感染者PBMC分泌IFN-γ。

附圖說明

圖1為多表位多肽免疫HHD-2小鼠后淋巴細胞增殖試驗檢測結果；