[發明專利]一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法

有效

• 申請號: 201210233377.2
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN102721802A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 朱海;李細清;李金峰
• 申請（專利權）人: 深圳市易瑞生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所 44268
• 代理人: 劉文求;楊宏

技術領域

本發明涉及生物醫學檢測領域，尤其涉及一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法。

背景技術

免疫學檢測方法是應用免疫學理論設計的一系列測定抗原、抗體、免疫細胞及其分泌的細胞因子的實驗方法。抗原借助表面的抗原決定簇與抗體分子超變區在空間構型上的互補，發生特異性結合。同一抗原分子可具有多種不同的抗原決定簇，若兩種不同的抗原分子具有一個或多個相同的抗原決定簇，則與抗體反應時可出現交叉反應。

抗原抗體結合除以空間構型互補外，主要以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等分子表面的非共價方式結合，結合后形成的復合物在一定條件下可發生解離，回復抗原抗體的游離狀態。解離后的抗原和抗體仍保持原有的性質。抗原抗體復合物解離度在很大程度上取決于特異性抗體超變區與相應抗原決定簇三維空間構型的互補程度，互補程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結合越牢固，不易解離；反之，則容易發生解離。

而小分子抗原或半抗原因抗原表位少，不能用夾心法進行測定，只能采用競爭法檢測模式。而現有的檢測小分子抗原的方法主要有酶聯免疫吸附試驗、免疫層析試驗、儀器分析等方法。酶聯免疫吸附試驗因其特異、靈敏、檢測成本低而得到廣泛應用。免疫層析試驗雖然簡便易用，但因其準確性不高，同樣限制了它的應用。儀器分析法準確、可靠，但因需要用到昂貴的設備和專業的技術人員，限制了它的應用，多用于確認檢測。

因此，現有技術還有待于改進和發展。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法，旨在解決現有免疫分析方法靈敏性偏低、不適于高靈敏檢測的問題。

本發明的技術方案如下：

一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述提高競爭免疫分析靈敏性的方法步驟如下：

預反應：將待檢測物質與受體/抗體進行預反應；

再反應：將預反應的反應產物與位于固相上的參與競爭反應的第二分子進行反應；

所述再反應過程中將預反應的反應產物分成一份或多份，分別與所述第二分子進行反應。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述再反應過程中，所述預反應的反應產物是以流動的方式流過所述固相表面與所述第二分子反應。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述再反應過程中，每一份預反應的反應產物與所述第二分子的反應時間在20min以內。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述再反應過程中，每一份預反應的反應產物與所述第二分子的反應時間在5min以內。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，每一份所述預反應的反應產物與所述第二分子進行反應后，將反應后的液體去除。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述預反應過程的反應溫度為0℃-65℃，反應時間為0-3小時。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述預反應過程的反應時間為30min。

所述的提高競爭免疫分析靈敏性的方法，其中，所述第二分子是指參與競爭反應的小分子與載體蛋白形成的偶聯物。

有益效果：本發明從反應方式上著手，提供一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法，主要是將待檢測的小分子物質首先與抗體/受體發生充分反應，然后再與位于固相上的參與競爭反應的第二分子在短時間內反應，這樣能大大提高了免疫分析方法的靈敏度。本發明方法操作簡單，成本低，不需要用到昂貴的設備和專業的技術人員，而且靈敏性高，適用于多種免疫分析方法。

具體實施方式

本發明提供一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

靈敏性偏低、不適于高靈敏檢測是免疫學檢測普遍存在的問題，因而人們開發出了多種免疫學檢測信號放大方法，如：酶標記、稀土熒光標記、放射物標記等方式提高檢測信號。而本發明從反應方式上著手，提供一種提高競爭免疫分析靈敏性的方法，主要是將待檢測的小分子物質首先與抗體/受體發生充分反應，然后再與位于固相上的參與競爭反應的另一種分子在短時間內反應，這樣能大大提高了免疫分析方法的靈敏度。

具體的，所述提高競爭免疫分析靈敏性的方法步驟如下：

預反應：將待檢測物質與受體/抗體進行預反應；

再反應：將預反應的反應產物與位于固相上的參與競爭反應的第二分子進行反應。