[發(fā)明專利]一種檢測NGAL膠體金試紙條及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210231509.8
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN102759623A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發(fā)明（設計）人: 蘇恩本;顏彬;王勇;黃力;陳偉
• 申請（專利權(quán)）人: 南京基蛋生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N33/68
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學診斷領(lǐng)域，具體涉及一種檢測中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL)膠體金試紙條及其制備方法。?

背景技術(shù)

繼發(fā)于腎小管細胞損傷（包括缺血性損傷或腎毒性損傷）的急性腎功能衰竭（AFR），盡管在支持治療法中取得了重大的進展，但是仍然是臨床醫(yī)學和腎病學中普遍而潛在破壞性的難題，該疾病具有持續(xù)的死亡率和高發(fā)病率的特點。研究表明，中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）作為lipocalin家族的一個新的成員，是診斷急性腎損傷的重要標志物之一。美國專利2004/0219603描述了中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）最為檢測腎小管細胞損傷早期發(fā)作的尿生物標記物。?

近年美國臨床化學協(xié)會（AACC）年度會議的研究結(jié)果發(fā)表得知檢測尿中中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白可能有助于臨床醫(yī)生檢測心臟移植患者環(huán)孢霉素誘導的毒性，以及調(diào)節(jié)環(huán)孢霉素劑量以預防其對腎臟造成的不可逆?zhèn)?。Kim?RW等表明心臟手術(shù)后尿及血中的NGAL在術(shù)后6小時達到最高水平，且尿NGAL及血NGAL水平與術(shù)后急性腎損傷AKI及不良預后相關(guān)。?

目前，檢測NGAL的方法主要有免疫吸附劑測定法（ELISA），中國專利CN101566633涉及膠乳增強免疫比濁法、夾心法ELISA、競爭法ELISA來測定NGAL的水平。然而，該方法對檢測設備有一定要求，操作繁瑣，檢測時間長，不能對急性腎功能衰竭進行快速早期預測，不能用于床邊快速診斷。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種特異性強、結(jié)果準確、操作簡單，適合床邊快速診斷的檢測NGAL膠體金試紙條及其制備方法，為急性腎功能衰竭進行早期預測提供一種簡單的檢測診斷方法及工具。?

為解決該問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)：?

一種檢測NGAL膠體金試紙條，包括塑料底襯、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊、吸水墊，其特征在于所述的硝酸纖維素膜上設有相互平行的質(zhì)控線和檢測線；所述的質(zhì)控線上含有兔抗人IgG抗體，所述檢測線含有一種NGAL單克隆抗體，所述的金標墊上有金標記的另一種NGAL單克隆抗體。

所述的檢測線上的NGAL單克隆抗體和金標墊上的另一種NGAL單克隆抗體由雜交瘤細胞株3B1和雜交瘤細胞株4B2分泌產(chǎn)生。雜交瘤細胞株3B1和雜交瘤細胞株4C2來源于南京基蛋生物科技有限公司，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏編號分別為CCTCC?NO：C201249和CCTCC?NO：C201250，保藏日期均為2012年5月9日。?

所述檢測線上的一種NGAL單克隆抗體和金標墊上的金標記的另一種NGAL單克隆抗體能夠相互配對。?

所述一種NGAL單克隆抗體為3B1，金標記的另一種NGAL單克隆抗體為4C2。?

所述一種NGAL單克隆抗體為4C2，金標記的另一種NGAL單克隆抗體為3B1。?

制備一種檢測NGAL膠體金試紙條的制備方法，其步驟包括：?

1）將一種NGAL單克隆抗體液噴到硝酸纖維素膜上形成檢測線，將兔抗人IgG抗體液噴到硝酸纖維素膜的另一區(qū)域形成質(zhì)控線；

2）將另一種NGAL單克隆抗體加到膠體金中，得到膠體金——抗體復合物溶液，將該復合物溶液涂覆玻璃纖維素膜或聚酯膜上得到金標墊；

3）將塑料底襯、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊、吸水墊進行粘貼，組裝成檢測NGAL膠體金試紙條。

所述的硝酸纖維素膜包被過程中，NGAL單克隆抗體液是用20mmol/L、pH7.4的PB（磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉）緩沖液稀釋到2.0mg/ml。?

雜交瘤細胞株3B1和雜交瘤細胞株4C2分泌產(chǎn)生的單克隆抗體具有不同的表位，已通過雙抗夾心法進行了鑒定。?

所述的質(zhì)控線包被兔抗人IgG抗體。?

所述金標墊與樣品墊的材料為聚酯膜、玻璃纖維膜。?

本發(fā)明利用雙抗夾心原理來檢測NGAL的含量，根據(jù)檢測線上條帶顏色來判斷樣品液中NGAL的含量，質(zhì)控線上如果沒有紫紅色條帶出現(xiàn)，則該試紙條失效。?

本發(fā)明的檢測NGAL膠體金試紙條具有以下優(yōu)點：1）與目前ELISA法檢測NGAL試劑盒相比，不需要專業(yè)人員，可直接觀察得到結(jié)果，也可以根據(jù)FIA8000系列免疫定量分析儀在十分鐘內(nèi)得到定量結(jié)果；2）檢測方法簡單，快速，適用于NGAL床邊快速診斷。本發(fā)明對急性腎功能衰竭進行快速早期預測，應用前景廣闊。?

附圖說明

圖1為一種用于檢測NGAL膠體金試紙條結(jié)構(gòu)示意圖。?