[發(fā)明專利]芹菜素在制備治療肺炎藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210231491.1
• 申請(qǐng)日: 2012-07-06
• 公開（公告）號(hào): CN102872003A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧旭明;董靖;邱家章;譚為
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/352
• 分類號(hào): A61K31/352;A61P11/00;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及芹菜素在制備治療肺炎藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

一、背景技術(shù)

芹菜素(Apigenin)是從傘形科植物旱芹等植物中提取分離出來的一種黃酮類化合物，具有一定的抗菌活性，對(duì)痢疾桿菌、白喉?xiàng)U菌、綠膿桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌以及腦膜炎球菌等均有抑制作用，最低抑菌濃度(MIC)在64-256μg/ml之間。但目前為止國(guó)內(nèi)外未見芹菜素用于治療細(xì)菌性肺炎報(bào)道。

細(xì)菌性肺炎是由肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、軍團(tuán)菌等感染所引起的疾病，該病在兒童、老年人和免疫缺陷患者中病死率極高。近年來，抗生素的大量使用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥率增高，使得細(xì)菌性肺炎的治療面臨無藥可治的局面。目前臨床上以金黃色葡萄球菌所導(dǎo)致的肺炎病情較為嚴(yán)重，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的肺炎病死率仍然較高。目前治療金黃色葡萄球菌肺炎的藥物通常使用苯唑西林和氯唑西林，但由于MRSA的出現(xiàn)，常常會(huì)導(dǎo)致治療失敗。因此，尋找新型、安全的治療藥物迫在眉睫。芹菜來自于來源廣泛的旱芹及多數(shù)水果和蔬菜中的成分，本發(fā)明研究證實(shí)了芹菜素對(duì)細(xì)菌性肺炎，尤其是耐藥性金黃色葡萄球菌引起的肺炎具有較好的治療效果。

二、發(fā)明內(nèi)容

芹菜素的分子結(jié)構(gòu)如下：

本發(fā)明通過兔紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷的保護(hù)試驗(yàn)以及小鼠金葡菌肺炎模型證實(shí)其治療金葡菌感染作用。

三、具體實(shí)施方式

1.溶血試驗(yàn)

將不同濃度的芹菜素與金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期，高速離心收集菌液上清。取100μL菌液上清、875μL?PBS及25μL脫纖維兔紅細(xì)胞混合均勻，37℃孵育15min，觀察不同濃度芹菜素處理的細(xì)菌上清溶血活性的變化。以不加芹菜素的細(xì)菌上清作為對(duì)照計(jì)算溶血比例。

表1.芹菜素對(duì)金葡菌α-溶血素溶血活性的作用

芹菜素(μg/ml)????溶血比例(％)????0????100????1????78.14????2????52.24????4????11.06????8????3.11

2.人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷的保護(hù)試驗(yàn)

金葡菌NCTC?8325-4于TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至取5ml的細(xì)菌培養(yǎng)物，離心并重懸于10ml的F12K培養(yǎng)基中。A549細(xì)胞于F12K培養(yǎng)基(加入10％胎牛血清)中于37℃，5％CO₂培養(yǎng)24小時(shí)后，以1.5×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔鋪于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100μl。細(xì)胞貼壁后，加入100μl金葡菌懸液，并加入不同濃度的芹菜素，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中于37℃，5％CO₂共培養(yǎng)8h。加入live(green)/dead(red)試劑，后于激光共聚焦顯微鏡(LSCM)下觀察A549細(xì)胞的狀態(tài)，活細(xì)胞顯綠色，死細(xì)胞顯紅色。

結(jié)果表明，芹菜素能夠保護(hù)金葡菌α-溶血素介導(dǎo)的人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷，該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。

3.小鼠金葡菌肺炎的實(shí)驗(yàn)治療學(xué)研究

3.1小鼠金葡菌肺炎模型