[發明專利]一種蟆葉秋海棠葉片離體再生體系建立的方法

無效

• 申請號: 201210230779.7
• 申請日: 2012-07-05
• 公開（公告）號: CN102696487A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 宣繼萍;郭忠仁;徐菲;劉永芝;賈曉東
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蟆葉秋海棠葉片離體再生體系建立的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)外植體的選取與消毒：選取3個月左右葉齡的葉片作為外植體，沖洗干凈后，進行消毒，消毒過程為：先以適量洗衣粉溶液浸泡清洗，后用自來水反復沖洗，放入質量份數為3％的H₂O₂中浸泡3min，取出后立即轉入含有2％(質量濃度)吐溫-80的0.1％升汞溶液中消毒3min，再以無菌水沖洗5-6次，每次6-8min，消毒濾紙吸干表面水分，將葉片邊緣切除后切成0.5-1cm²的方形小塊。

(2)不定芽的誘導：取步驟(1)中處理得到的外植體方形小塊，將葉片以遠軸面接種于誘導培養基中進行不定芽的誘導，培養溫度為25±2℃，首先在黑暗中培養24h，然后進行正常光照培養15d；所述正常光照培養條件為：光照時間為14h/d，光照強度為1300lx；所述誘導培養基為MS+0.8mg/L6-BA+0.3mg/L?IBA+0.5mg/L?GA₃，pH值為6.0；

(3)高壓靜電場HVEF處理：強度為5KV/cm，時間1小時；

(4)不定芽的繼代增殖：將誘導得到的不定芽切割后，接入繼代增殖培養基中進行繼代培養20d，培養溫度為25±2℃，光照時間為14h/d，光照強度為1600lx；所述繼代增殖培養基為MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/L?IBA+0.2mg/LKT，pH值為6.0；

(5)根的誘導：將步驟(4)中繼代增殖得到的蟆葉秋海棠試管苗接入生根培養基中進行生根培養15d，培養溫度為25±2℃，光照時間為14h/d，光照強度為1600lx；所述生根培養基為1/2MS+0.2mg/L?IBA+0.1mg/LNAA，pH值為6.0；待不定跟數5條左右，植株整體生長穩健時，可準備移苗出瓶。

(6)將培養瓶的瓶蓋打開，煉苗2-3天，移栽入扦插基質中，所述扦插優選為：按照3∶2∶1∶1的重量比例將馬肝土、黃土、泥炭土和珍珠巖混勻，地上部分噴灑0.1％的多菌靈，每天噴水2次，保證濕度，避免陽光直射。

2.通過權利要求1所述方法制備的蟆葉秋海棠種苗。