[發明專利]一種利用中國石蒜葉片組培快繁的方法

無效

• 申請號: 201210230481.6
• 申請日: 2012-06-28
• 公開（公告）號: CN102972289A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 姜小鳳;童再康;時劍;高燕會
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用中國石蒜葉片組培快繁的方法，其技術方案按如下步驟進行：

(1)培養基配方和配制

適宜外植體幼嫩葉片誘導的培養基配方：MS+6-BA?20mg/L+NAA?1.0mg/L+蔗糖30g/L

適宜無菌小葉誘導的培養基配方：MS+6-BA?0.5mg/L+2，4-D?1.0mg/L+蔗糖30g/L

繼代培養培養基配方：MS+6-BA?0.5mg/L+2，4-D?1.0mg/L+蔗糖30g/L

生根培養培養基配方：1/2MS+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L

具體的配制方法：

A、按照MS培養基配方，把大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物、植物激素分類，每一類中各種藥品分別稱量，可按照一定倍數配制濃縮液，然后按照順序量取所需體積混合在一起，最后加蒸餾水，定容至1升；

B、然后加入蔗糖、瓊脂，調節ph值至5.9，微波爐加熱，煮沸至溶液中瓊脂完全溶解呈透明為止；

C、將配制好的培養基分裝在事先準備好的培養瓶中，1L一般可分裝成20-22瓶，然后蓋上蓋子并注明標簽。最后將用牛皮紙包好的培養皿、濾紙以及蒸餾水一道進行高壓滅菌，滅菌溫度為121℃，維持時間18-25min；

D、滅菌過的培養基通常放在接種室或培養室中保存，放置24小時后使用，一般應在滅菌后的兩周內用完。

(2)葉片采集和處理

A：采集中國石蒜幼嫩葉段，采樣袋密封帶回實驗室，清水仔細沖洗，去除葉片表面污物，然后移至接種室；

B：選取中國石蒜無菌苗剛長出的嫩葉，在超凈工作臺上截成1cm左右的片斷，直接接種；

(3)滅菌和接種

將清洗干凈的葉段在超凈工作臺上按下列順序進行滅菌：75％乙醇中消毒30-60s→無菌水清洗2次→0.1％?HgCl2溶液中滅菌8-10min→無菌水清洗4次→無菌濾紙吸干表面水分；

然后用解剖刀將葉段切成0.8-1.0cm的片段，接種在培養基上，以上操作過程在酒精燈火焰30cm范圍內進行；

(4)培養條件

將接種葉片片段的培養瓶整齊擺放在培養架上，誘導階段為暗培養，溫度25±2℃；

繼代培養階段和生根培養階段在光照條件下培養，光照強度1000-1200lx，光照時間16小時，溫度25±2℃；

(5)繼代培養

待葉片組織分化出的白色小鱗莖達到0.5cm高度時，進行繼代培養，選用繼代培養培養基，轉接操作在超凈工作臺上進行，將小鱗莖上半部切除后，轉接于新的培養基上，繼代培養可連續培養多代，以實現快速增殖；

(6)生根培養

繼代培養得到的小鱗莖達到0.5cm以上時，即可進行生根培養，將生長勢健壯的中國石蒜小苗轉接于生根培養基上，待長出3條以上的白色根須后，進行馴化；

(7)馴化移栽

A、馴化煉苗分兩步進行，第一步，每天將培養瓶的蓋子揭開一段時間，使幼苗接觸外界空氣，并逐漸延長時間，大約一周后完全揭開瓶蓋；

B、第二步，將幼苗取出，用清水清洗，除去附著的培養基，然后修剪較長的根須，移栽于基質中，基質由泥炭∶珍珠巖∶蛭石按1∶1∶1配制，保持基質濕潤，空氣濕度在90％以上，并加蓋遮陽網；

C、兩周后，待幼苗葉片伸展，即可除去遮陽網，進行正常栽培管理。