[發(fā)明專利]一種雙價DNA疫苗及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210229964.4
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102755652A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發(fā)明（設計）人: 肖波;遲曉艷;王曉潔;張莉
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/295;A61K39/15;A61P31/14;C12N15/46
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立

1.一種雙價DNA疫苗，其特征在于，所述雙價DNA疫苗是一種質粒DNA構建物，該構建物包括兩種編碼草魚呼腸孤病毒抗原蛋白的質粒DNA序列和一個質粒載體。

2.根據(jù)權利要求1所述的雙價DNA疫苗，其特征在于，所述兩種編碼草魚呼腸孤病毒抗原蛋白的DNA序列包括下述序列中的任意兩種：具有SEQ.1DNA序列的草魚呼腸孤病毒vp6基因的全序列、全序列基礎上的任意改變序列或其片段；具有SEQ.2DNA序列的草魚呼腸孤病毒vp7基因的全序列、全序列基礎上的任意改變序列或其片段；具有SEQ.3DNA序列的草魚呼腸孤病毒vp5基因的全序列、全序列基礎上的任意改變序列或其片段。

3.根據(jù)權利要求1所述的雙價DNA疫苗，其特征在于，所述質粒載體為在質粒pIRES、pcDNA3系統(tǒng)、pTracer-CMV2、pShuttle-CMV、pVAX1、pGEM系統(tǒng)中任一個或幾個質粒的基礎上利用限制性核酸內切酶剪切或通過PCR擴增后再酶切獲得的相應片段拼接而得。

4.根據(jù)權利要求3所述的雙價DNA疫苗，其特征在于，所述限制性核酸內切酶為HindⅢ、NheI、XhoI、EcoRI、XbaI、NotI、NdeI、MluI、SalI、BamHI、ScaI、KpnI、smaI、BglⅡ、EcoRV、PvuI、NcoI、PmeI中的任意一種或幾種。

5.一種雙價DNA疫苗的制備方法，其特征在于，步驟如下：

1）從NCBI中選取2個草魚呼腸孤病毒的基因序列，搜索其中的開放閱讀框，在AUG上游加入利于高效表達的kozak序列（GCCACC），根據(jù)草魚基因表達所用的偏愛性密碼子情況，對上述2個基因序列中與偏愛性密碼子同義的氨基酸用偏愛性密碼子替換，并合成替換后的基因序列，將合成的2個基因序列經(jīng)相應的限制性內切酶酶切后分別插入到相應的質粒中，構建成2個重組DNA分子；

2）對1）所構建的2個重組DNA分子分別用相應的限制性內切酶酶切，獲得所需要的DNA片段；

3）將2）得到的2個DNA片段進行拼接，即得雙價DNA疫苗。

6.一種雙價DNA疫苗在制備抗草魚呼腸孤病毒的藥物中的應用。

7.根據(jù)權利要求6所述的雙價DNA疫苗的應用，其特征在于，所述草魚呼腸孤病毒可感染處于魚種期的草魚、青魚、麥穗魚、布氏鰲條魚。