[發明專利]一種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法

有效

• 申請號: 201210229952.1
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102808015A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 錢偉;梅家琴;丁一娟;魏大勇
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

技術領域

本發明屬于植物病蟲害抗性鑒定方法，具體涉及一種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法。?

背景技術

菌核病可危害400多種植物，比如油菜，每年因菌核病的危害我國油菜減產10–80%。培育抗病品種是防治菌核病危害最經濟的途徑。簡單易行，準確的菌核病抗性鑒定方法是篩選抗病材料的關鍵。?

目前菌核病抗性鑒定有葉片抗性鑒定和莖桿抗性鑒定，葉片抗性鑒定包括離體葉片接種、葉腋接種、葉柄接種、子葉接種等。這些方法雖然操作簡單，但葉片的抗性并不能完全反映莖桿的抗性。菌核病浸染莖桿后，將導致產量嚴重降低。對莖桿抗性鑒定有田間莖桿牙簽接種法和莖桿菌絲塊捆綁法，兩種方法簡單易行，適合大規模接種鑒定，但容易受大田環境條件的影響，接種鑒定不穩定。比如遇到干燥等不利于菌核病發病的氣候條件，將導致大田接種鑒定的失敗。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種簡單、穩定的莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法。本方法在室內可控條件下，創造適宜菌核病浸染的溫度和濕度環境，對離體的莖桿進行接種鑒定，根據菌斑的長度來衡量材料抗菌核病的強弱。?

本發明的技術方案如下：?

一種離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿鋪滿核盤菌菌絲的PDA培養基的邊緣打孔，獲得大小一致的PDA菌絲塊，作為接種體用于離體莖桿接種；然后截取莖桿并將離體莖桿轉移至室內，在莖桿上制造與接種體相同形狀的創傷后，覆蓋接種體，在溫度和濕度恒定的室內環境，進行核盤菌接種；記錄菌斑擴展長度，衡量抗菌核病的強弱。?

本發明的優點：該接種方法是在實驗室可控環境條件下，發病條件一致，接種鑒定穩定，方法簡單，接種效率高，周期短，接種部位靈活，可對單株進行重復鑒定，適合對材料進行大規模接種鑒定。?

附圖說明

圖1為接種油菜莖桿后第3天菌斑的長度。?

具體實施方式

以下以鑒定蕓苔屬莖桿菌核病抗病性為本發明方法的一種具體實施方式，但并不是對本發明方法的限定，任何不超離本發明實質內容的變換，仍應屬于本發明的保護范圍。?

實施例1?

1.接種體的準備?

1）病原菌采集于重慶市油菜工程技術中心試驗田，其純化過程為：將采集的菌核接種于馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA）中，于22℃黑暗培養2天，從邊緣挑取菌絲接入新的PDA培養基，2天后再次將邊緣的菌絲轉接，如此反復，直至培養基中長出的菌絲不含其它雜菌為止。其中PDA培養基的制備為：200g土豆、20g蔗糖和15g瓊脂粉，定容到1L。?

2）離體實驗接種體（PDA菌絲塊）制備：取活化后的菌種一小塊，接種于裝有PDA培養基的無菌培養皿中央，于22℃、85%濕度條件下培養2天，待菌絲均勻鋪滿培養基表面后，用直徑6mm的打孔器沿培養皿邊緣打孔，獲得的PDA菌絲塊即可用于離體莖桿接種。?

2.離體莖桿接種在終花期，在距地面20cm處截取約30cm長的主莖并截取約30cm長最底端的2根側枝，將莖桿兩端用保鮮膜纏繞（以防止水分散失）。以17份蕓薹屬植物為例進行菌核病接種鑒定。這些材料包括3份白菜（B.rapa），2份甘藍（B.oleracea），6份甘藍型油菜（B.napus），4份芥菜型油菜（B.juncea）和2份埃塞俄比亞芥菜（B.carinata），其具體材料見表1。?

接種是在一個面積約20平方米、可控溫的接種室內進行。首先將1×2m²的三合板放置于大小相稱、高40cm的鋁合金框架上，在三合板鋪上濕毛巾，上面墊一層濾紙。將取回的莖桿置于備好的濾紙上，用直徑為4mm的打孔器在莖桿表面打2個孔，從而造成表面創傷，2個孔間的間隔為10cm。將直徑為6mm的PDA菌絲塊帶菌面緊貼于創傷處（圖1）。接種完畢后，在三合板上方再放置一個相同大小的鋁合金框架，最后用塑料膜將三合板和上方的鋁合金框架一同密閉，并保持密閉間的濕度維持在90-95％內一恒定濕度。室內溫度控制在22-24攝氏度內一恒定溫度。離體接種3天后，測量菌斑的長度，發現材料間的菌斑大小有差異明顯，其具體表現見表1。主莖和側枝菌斑的大小存在顯著的正相?關（r=0.657，P=0.911）。主莖和側枝的菌斑長度和莖桿的直徑不存在顯著相關性(主莖：r=0.056,P=0.824；側枝：r=-0.021,P=0.935)。?

本實施例結果如表1。?

該實例的分析結果一致表明，離體莖桿接種鑒定是一種可大規模操作，環境條件可控，穩定性好，接種效率高，靈活度高，可實現單株的重復鑒定的方法。?