[發明專利]一種縮短植物細胞懸浮培養周期的方法

無效

• 申請號: 201210229723.X
• 申請日: 2012-07-05
• 公開（公告）號: CN102839190A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 李興林;高潔;曹愛佳;韓楊;肖天劍;趙俊;張黎明;滿淑麗;高文遠
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N1/21;C12N5/10;C12N5/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種縮短植物細胞懸浮培養周期的方法。其特征是：

1.構建p53基因RNAi表達載體工程菌。通過比對Genbank注冊的植物p53基因的核苷酸序列，任選其兩個保守區核苷酸序列分別為正向片段I、II，并設置其對應的反向序列I’和II’；結合引物設計引入GU-AG類內含子端部堿基，通過PCR構建I-AC-II’-II-CT-I’的RNAi片段；篩選出插在pCAMBIA2300表達載體并能轉化植物細胞的工程菌。

2.從外植體誘導早期愈傷組織；早期愈傷組織與根瘤農桿菌工程菌共培養；隨后在含抗生素的培養基中進行選擇培養，篩選出抗性愈傷組織并進行繼代培養；將松散的抗性愈傷組織在液體培養基振蕩培養；培養物過篩后繼續進行振蕩懸浮培養，獲得穩定的懸浮細胞系。

3.利用看護培養手段，從懸浮細胞中篩選出生長速度快、由單細胞系形成的愈傷組織；將該愈傷組織在液體培養基中振蕩培養；培養物過篩后繼續進行懸浮培養，獲得由單細胞和小細胞團組成的懸浮系；對該懸浮系的細胞形態大小、生長周期、主要代謝產物含量及其穩定性等進行鑒定，最后獲得的懸浮細胞作為種子進入大規模培養。

4.通過培養基和培養條件的優化，獲得植物細胞生長和產物積累的最適碳氮源、pH、溫度、溶氧量和最佳接種量等主要發酵工藝參數。