[發明專利]剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制備白血病治療藥物中的應用

有效

• 申請號: 201210229423.1
• 申請日: 2012-07-03
• 公開（公告）號: CN102747083A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 鄭胡鏞;鮑時來;張寒;杜超豪;鄒麗敏;郜慧芳
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京兒童醫院;中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/02;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制備白血病治療藥物中的應用。

背景技術

選擇性剪接是當前腫瘤學的研究熱點之一，研究認為它參與了腫瘤的發生過程。SF2/ASF蛋白是一類由SFRS1（Serine/Arginine-rich?Splicing?Factor1）基因編碼的具有典型SR（Serine/Arginine-rich）結構特征的剪接因子，而SR蛋白家族是一類富含精氨酸和絲氨酸序列的結構域蛋白質，不僅參與前體mRNA的組成性剪接，也是選擇性剪接的重要調節因子。SR蛋白可調節許多已知原癌基因及腫瘤抑制基因的選擇性剪接，于轉錄后水平激活它們，從而導致細胞的生長和繁殖失控。Yea等報道，轉錄因子KLF6的異構體KLF6-SV1在肝細胞癌中明顯增高，使細胞無限增殖導致肝癌的發生。此外，它們還參與一系列剪接后事件：mRNA核質運輸、mRNA衰減和mRNA翻譯等。SR蛋白的本質是mRNA代謝的調節因子，一旦功能受到破壞，將導致發育障礙和疾病發生。

SF2/ASF蛋白在蛋白質-蛋白質及蛋白質-RNA互作、胞內定位及運輸、以及前體mRNA的選擇性剪接中起重要作用。在不同組織中，SF2/ASF的表達受到嚴格調控，它的表達量對于細胞和機體穩定發揮生理功能具有極其重要的作用。SF2/ASF蛋白的表達量可調控原癌基因Ron的選擇性剪接，并在腫瘤浸潤時影響細胞的粘著和遷移性。

研究發現SF2/ASF蛋白在許多腫瘤中存在過表達現象。Karni等發現，SF2在各種人類腫瘤中均表達上調，部分是由于SFRS1基因擴增所導致的；在SF2/ASF表達上調的人類肺癌細胞系中恢復SF2/ASF正常表達可逆轉細胞系的轉化狀態；在成纖維細胞中異位高表達SF2/ASF蛋白能夠誘導細胞發生轉化，導致裸鼠體內形成腫瘤，由此得出SF2/ASF是一個原癌蛋白。

此外，SF2/ASF在mTOR（mammalian?target?of?rapamycin）信號通路中也起著非常重要的作用。現已明確mTOR信號通路在許多腫瘤中被激活，該通路的阻滯劑已作為臨床抗癌藥物進入臨床II期試驗。研究發現，SF2/ASF可改變mTOR信號通路的活性，并特異性激活該通路中的mTORC1分支。采用RNAi干擾技術抑制mTOR通路，可去除SF2過表達細胞的致瘤能力。此外，SF2表達上調的腫瘤對mTOR抑制劑具有很高的敏感性。

白血病是兒童時期最常見的惡性腫瘤和最常見的死亡原因。我國每年新發兒童白血病1.5萬例左右，其中兒童急性淋巴細胞白血病（Acute?Lymphoblastic?Leukemia，ALL）是最常見的類型，占兒童白血病的75%。20世紀80年代后，由于多藥聯合強化療及有力的支持治療，兒童ALL的治愈率已達80%左右，但近30年來ALL治愈率無明顯提高，主要原因是白血病的發病機理至今不明。此外，白血病復發也是重要因素之一。目前兒童白血病的復發率高達15%左右，已成為影響白血病患兒康復的最關鍵因素，不僅給患兒本身、而且給家庭及社會帶來了不可彌補的嚴重傷害和不和諧因素。

發明內容

本發明的目的是提供一種剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制備白血病治療藥物中的應用。所述剪切因子癌蛋白SF2/ASF的全長cDNA如序列表序列10所示，第210-956位為開放閱讀框，編碼序列表序列9所示的蛋白。

本發明提供抑制或降低剪切因子癌蛋白SF2/ASF表達的可生成小干擾RNA的短發夾RNA，其核苷酸序列由一個莖環序列及兩個分別位于所述莖環序列兩側的反向重復序列組成，所述兩個反向重復序列分別為序列表序列1和序列表序列2所示序列；或，序列表序列3和序列表序列4所示序列。

本發明還提供由所述短發夾RNA衍生的如下1）或2）的小干擾RNA：

1）一條鏈的核苷酸序列如序列表序列1所示，另一條鏈的核苷酸序列如序列表序列2所示；

2）一條鏈的核苷酸序列如序列表序列3所示，另一條鏈的核苷酸序列如序列表序列4所示。

本發明還提供所述RNA（即所述短發夾RNA和所述小干擾RNA）的編碼基因。

所述基因是由序列表序列5和序列表序列6的單鏈DNA組成的雙鏈DNA分子，或由序列表序列7和序列表序列8的單鏈DNA組成的雙鏈DNA分子。

本發明還提供含有所述基因的表達所述RNA（即所述短發夾RNA和所述小干擾RNA）的重組表達載體。