[發明專利]產低溫乳糖酶的拉恩氏菌篩選及培養方法無效
| 申請號： | 201210228731.2 | 申請日： | 2012-07-04 |
| 公開（公告）號： | CN102965287A | 公開（公告）日： | 2013-03-13 |
| 發明（設計）人： | 楊瑞金;沈蓮蓮;華霄 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/04 | 分類號： | C12N1/04;C12N9/38;C12N1/20;C12R1/01 |
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| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 低溫 乳糖酶 拉恩氏菌 篩選 培養 方法 | ||
1.一種產低溫乳糖酶的拉恩氏菌篩選方法，包括以下步驟：
(1)初篩：吸取富集后的培養液用倍比稀釋法制不同的稀釋度移入初篩平板中，涂勻，15℃培養，篩選藍色菌落，分離純化，斜面保存。
(2)復篩：選取上限溫度為40℃不生長的菌株為試驗菌株。活化斜面保藏試驗菌株，轉接發酵培養基于15℃進行搖瓶培養(50mL/250mL)48h。提取粗酶液，測定15℃下水解活力，選取高酶活菌株Rahnella?sp.R3為產低溫乳糖酶的菌株。
2.一種利用產低溫乳糖酶的拉恩氏菌制備產酶發酵液的方法，其特征在于：
(1)采用入權利1所述的產低溫乳糖酶的Rahnella?sp.R3為生產菌株；
(2)設定最佳發酵工藝：乳糖5％，蛋白胨1.5％，酵母浸膏1.0％，氯化鈉0.3％，裝液量為250mL三角瓶裝50mL，培養基初始pH7.0±0.2；接種量4％，15℃，200r.min-1發酵32h。
3.權利要求1所述的拉恩氏菌R3(Rahnella?sp.R3)菌株具有以下特征：
(1)生長特征：菌株最適生長溫度為15℃；最適生長pH為7
(2)菌體特征：革蘭氏陰性，短桿菌，長度1.5μm～2μm，有莢膜，無芽孢。
(3)菌落特征：菌落呈黃色，圓形隆起，質地粘稠，邊緣光滑，不透明，易挑取。
(4)生理生化特征：發酵D-葡萄糖產酸產氣，明膠水解試驗顯陰性，賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶及精氨酸雙水解酶都呈陰性，硝酸鹽還原、MR(甲基紅)、VP(伏-普二氏試驗)呈陽性。可發酵乳糖、麥芽糖、蔗糖、L-鼠李糖、棉籽糖、纖維素糖。
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