[發(fā)明專利]制備癲癇發(fā)作動(dòng)物模型的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210228629.2
• 申請(qǐng)日: 2012-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN103505455A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟凡剛;張建國;陳寧;楊岸超;劉煥光;葛燕;劉崇;胡文瀚;張凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 孟凡剛
• 主分類號(hào): A61K31/401
• 分類號(hào): A61K31/401;A01K67/027
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備癲癇發(fā)作動(dòng)物模型的方法以及使用該方法制備的癲癇發(fā)作動(dòng)物模型。具體地，本發(fā)明涉及一種通過向靈長(zhǎng)類動(dòng)物的海馬微量注射海人酸來制備癲癇發(fā)作動(dòng)物模型的方法，以及通過該方法制備的靈長(zhǎng)類動(dòng)物癲癇發(fā)作模型。

背景技術(shù)

癲癇發(fā)作是大腦神經(jīng)元異常放電引起的癲癇發(fā)作性腦功能異常。發(fā)作大多短暫并且有自限性，由于異常放電的腦功能區(qū)不同，臨床可有多種發(fā)作表現(xiàn)，包括部分性發(fā)作或全面性發(fā)作，具體表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺異常，或是行為認(rèn)知、植物神經(jīng)功能障礙。全面性發(fā)作和復(fù)雜部分性發(fā)作，往往伴有不同程度的意識(shí)障礙。

癲癇是神經(jīng)元的過渡同步異常放電，其發(fā)生機(jī)制主要是由于腦內(nèi)興奮性氨基酸與抑制性氨基酸的失衡引起，即一方面腦內(nèi)興奮性機(jī)制增強(qiáng)，一方面抑制性減弱。前者通過腦內(nèi)興奮性氨基酸介導(dǎo)，主要是谷氨酸和天冬氨酸，它們通過與神經(jīng)元上的谷氨酸受體結(jié)合，介導(dǎo)G蛋白耦聯(lián)的離子通道，獲者與興奮性氨基酸受體(N-甲基-D-天門冬氨酸鹽受體)結(jié)合，導(dǎo)致大量鈣離子和鈉離子內(nèi)流，而鉀離子、鎂離子則外流，產(chǎn)生去極化。后者通過抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)介導(dǎo)，GABA釋放出來與其受體結(jié)合后，氯離子通道打開，氯離子內(nèi)流使突觸后膜超極化。

目前的癲癇動(dòng)物模型按照發(fā)作表現(xiàn)分為：急性單純部分性發(fā)作，慢性單純性部分性發(fā)作，復(fù)發(fā)部分性發(fā)作，全面強(qiáng)直陣攣發(fā)作，失神發(fā)作，癲癇持續(xù)狀態(tài)，難治性癲癇；按照發(fā)生機(jī)制分為：遺傳性癲癇，癲癇免疫模型，外傷性癲癇模型，皮質(zhì)發(fā)育障礙動(dòng)物模型；按照制備方法分為：化學(xué)藥物模型，金屬植入，電刺激等。難治性癲癇的病因和發(fā)作機(jī)制復(fù)雜，發(fā)作無預(yù)見性，發(fā)作程度難以控制。Loscher(Loscher?W.Animal?models?of?intractable?epilepsy.Prog?Neurobiol，1997，53：239-258.)提出的在實(shí)驗(yàn)研究中，判斷癲癇動(dòng)物模型是否適合人類癲癇的標(biāo)準(zhǔn)有三條：①模型的生物電發(fā)放和發(fā)作形式必須與人類癲癇一致。②如若無發(fā)作癥狀，EEG須顯示有生物電異常發(fā)放，稱為癲癇樣放電。③抗癲癇藥不能控制其滿意發(fā)作。目前國際上唯一被認(rèn)可的耐藥性癲癇模型是由Loscher等建立的大鼠苯妥英鈉杏仁核電點(diǎn)燃癲癇模型，但是該模型的缺點(diǎn)是，動(dòng)物不易飼養(yǎng)，點(diǎn)燃率低，容易死亡，而且大鼠與人的種屬差異，其解剖結(jié)構(gòu)、生理功能及生化代謝與人差別較大，分子生物學(xué)研究生物可信度不高。

至今國內(nèi)外研究者用海人酸作為致癇劑，已經(jīng)采用不同的給藥途徑和方式在多種動(dòng)物身上建立急性癲癇模型、慢性點(diǎn)燃模型，并廣泛用于癲癇發(fā)生機(jī)制的研究，結(jié)果表明海人酸所致癲癇與臨床顳葉癲癇發(fā)作類型相似，具有建立過程可重復(fù)性強(qiáng)，劑量小，點(diǎn)燃率高等優(yōu)點(diǎn)，是一種較好的癲癇模型。

靈長(zhǎng)類動(dòng)物與人的親緣關(guān)系最近，國內(nèi)外至今仍無恒河猴海人酸癲癇模型的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明的目的是提供一種制備癲癇發(fā)作動(dòng)物模型的方法。

因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種制備靈長(zhǎng)類動(dòng)物癲癇發(fā)作模型的方法，該方法包括將劑量為6.0-9.0μl的2.0μg/μl海人酸施用于靈長(zhǎng)類動(dòng)物的右側(cè)海馬來誘發(fā)癲癇發(fā)作。

在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了通過本發(fā)明的方法制備的癲癇發(fā)作動(dòng)物模型。

在本發(fā)明中，靈長(zhǎng)類動(dòng)物包括但不限于，猴科、猩猩科(包括大猩猩、黑猩猩等)、猿類(包括長(zhǎng)臂猿、類人猿等)，優(yōu)選恒河猴。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，海人酸通過立體定向方法微量注射給藥。

本發(fā)明選擇了與人類親緣關(guān)系最近的恒河猴作為受試對(duì)象，初步建立恒河猴癲癇發(fā)作模型，觀察行為學(xué)及腦電圖改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組的4只恒河猴通過立體定向技術(shù)向海馬微量注射海人酸后8-12分鐘內(nèi)，均發(fā)生了由部分性發(fā)作到全面強(qiáng)直-陣亂發(fā)作即1-5級(jí)癇性發(fā)作，且用腦電圖記錄到了不同時(shí)期的癲癇放電，證實(shí)了海人酸在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中的致癇作用。本次試驗(yàn)，恒河猴經(jīng)歷了伴咀嚼的吞咽動(dòng)作及呼吸加快，并出現(xiàn)惡心嘔吐胃內(nèi)容物等自主神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，逐漸發(fā)展到單側(cè)肢體的不自主抽搐，繼而發(fā)展到雙側(cè)肢體的不自主抽搐，濕狗樣抖動(dòng)以及全身強(qiáng)直-陣攣等即部分性發(fā)作繼發(fā)全面強(qiáng)直陣攣性發(fā)作的全過程，發(fā)作形式與人類的顳葉癲癇極為相似。