[發明專利]一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基

無效

• 申請號: 201210227774.9
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102703568A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 候素君;秦娜
• 申請（專利權）人: 候素君
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及檢驗微生物培養領域，具體涉及一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基。

背景技術

牙周炎是口腔中的常見病和多發病，屬于細菌感染性疾病。流行病學研究表明，牙齦卟啉菌（Porphyromonas?gingivalis，P.gingivalis）與牙周炎的發生、發展顯著相關，是牙周炎的優勢致病菌。牙周炎發病后期引起的牙齦萎縮、牙槽骨喪失一般難以再生，因此，牙周炎的早期診斷、P.gingivalis的早期檢出至關重要。目前的P.gingivalis檢驗手段主要是齦下菌斑采樣進行聚合酶鏈式反應（polymerase?chain?reaction，PCR），該種方法需要對樣本進行DNA提取和PCR引物設計，且需要配備PCR相關儀器設備，成本昂貴，操作復雜。微生物培養是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術，而選擇性培養基是用來促進或抑制一定類型的生物體（如細胞或細菌等）而設計的培養基，利用這種培養基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。人類口腔中寄居著500多種細菌，其中定植在齦下的就有300多種，正是由于這種復雜的樣本環境，使得牙垢標本P.gingivalis的培養分離率低，口腔主流菌群中的鏈球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟氏菌、乳桿菌、螺旋體、假絲酵母在目前的培養基中比牙齦卟啉菌生長更快，很快覆蓋了培養基，牙齦卟啉菌無法生長。

發明內容

本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種能夠用于牙垢標本的，對牙齦卟啉菌分離率高的培養基。

本發明解決其技術問題的技術方案是：一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基，其特征在，配制1000ml培養基的配方中含有：麥芽浸粉15~30g；雞蛋蛋白液150~200ml；濃度為5?mg/ml的氯化血紅素溶液2.5?ml；濃度為10mg/ml的維生素K1乙醇溶液0.5ml；枸櫞酸鎂0.1~0.4g；瓊脂15~20g；共殺素15~20mg；泰利霉素8~12mg；利奈唑胺5~10mg；天門冬素?3.6?g；四水檸檬酸鈣0.01~0.2g；蒸餾水加至1000ml。

優化方案中，每1000ml培養基還含有大蒜榨出汁0.05~0.5g。

優化方案中，每1000ml培養基還含有L-半胱氨酸0.01~0.1g。

優化方案中，每1000ml培養基還含有濃度200g/L的黃精水煮液200~300ml。

最優化方案中，每1000ml培養基還含有大蒜榨出汁0.05~0.5g；L-半胱氨酸0.01~0.1g；濃度200g/L的黃精水煮液200~300ml。

一種用于牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）取黃精加水煮沸1小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；

（2）取去皮新鮮大蒜洗凈后，粉碎機榨汁并過濾，得大蒜榨出汁；

（3）取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素K1乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利霉素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶于步驟1所得黃精水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，85℃間歇滅菌2次，每次45?min，滅菌后分裝。

其中所述的麥芽浸粉提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和四水檸檬酸鈣為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長；氯化血紅素和維生素K1為營養劑；瓊脂是培養基的凝固劑；共殺素可以抑制革蘭氏陽性菌蛋白質的合成，對于廣泛耐藥的革蘭氏陽性菌也有效；泰利霉素對于奈瑟氏菌、乳桿菌、假絲酵母具有一定的抑菌作用；利奈唑胺對耐藥性金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌和腸球菌屬等均具有良好活性；天門冬素、L-半胱氨酸屬氨基酸類，為營養劑；雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質對促進牙齦卟啉菌的繁殖和生長都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持培養基pH?值恒定的作用。大蒜榨出汁所含的蒜酶、過氧化酶、磷酸酯酶及水解酶等，有氧化和水解作用，可以致使牙垢標本中的核梭桿菌、脆弱類桿菌胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團塊，最終導致細菌變形及破裂，達到抑制核梭桿菌、脆弱類桿菌的作用。黃精為百合科植物黃精、多花黃精和滇黃精的根莖，含有蔗糖、葡萄糖、葉酸、多種氨基酸等成分，可以提供能量代謝、細胞發育、新陳代謝因子，且水煮液對堇色毛癬菌、紅色表皮癬菌、石膏樣毛癬菌、考夫曼-沃爾夫氏表皮癬菌、螺旋體、皰疹病毒均有抑制作用。

本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點。

具體實施方式