[發明專利]一種依替米星的分離純化方法

無效

• 申請號: 201210227630.3
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102718813A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 劉曉寧;王楠;魏榮卿
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C07H15/236
• 分類號: C07H15/236;C07H1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

(一)技術領域

本發明涉及一種依替米星的分離純化方法，具體涉及一種使用聚苯乙烯-二乙烯基苯型樹脂梯度洗脫分離純化依替米星的技術。

(二)背景技術

硫酸依替米星(Etimicin?Sulfate，89-07)是我國科研人員自行研制的，擁有自主知識產權的高效、低毒、抗耐藥菌的新一代半合成氨基糖苷類抗生素。

硫酸依替米星是1-N-乙基慶大霉素C_1a的硫酸鹽。而1-N-乙基慶大霉素C_1a是慶大霉素C_1a分子中脫氧鏈霉胺1-N位被乙基取代的衍生物，乙基的引入使硫酸依替米星對臨床分離的多種耐藥菌有較好的抗菌作用，同時其毒性副作用也較母核化合物慶大霉素C_1a有明顯的降低。由于依替米星和慶大霉素C_1a的理化性質非常相似，這就對兩種物質的分離非常高的要求。目前關于依替米星的分離純化的文獻報道較少。中國專利CN1040177C(申請號93112412.3)公開了一種以大孔樹脂分離依替米星的方法，但是該方法得到依替米星的純度只有90％；CN101928312A(申請號201010132963.9)公開了一種依替米星的分離方法，即以弱酸型陽離子樹脂為分離填料，用低濃度氨水解析，至出口無旋光時換乙醇進行洗脫，但是此方法的缺點有兩點：一是95％乙醇需要量大，并且由于分離過后的乙醇濃度低，不能回收，導致廢水中乙醇含量高，污染環境；并且大量95％乙醇的使用，不僅使得回收成本提高，也造成能源的浪費；二是工藝復雜。為此尋找一種節約能源，并且能有效分離依替米星和慶大霉素C_1a的方法，對于工業生產具有重要的意義。

(三)發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺點，通過開發研究一種能對依替米星進行分離純化的方法，該操作方法簡單，并且依替米星產品的純度在98％以上、得率在85％以上，更適于工業化生產。

本發明的目的可通過如下措施來實現：

本發明提供的聚苯乙烯-二乙烯基苯型樹脂分離依替米星的方法，按以下操作步驟進行：

(1)樹脂的預處理：每次實驗前將400g聚苯乙烯-二乙烯基苯型樹脂依次用去離子水(冷水)洗，去離子水(熱水)洗，鹽酸溶液(V/V4％)洗，去離子水水洗至中性，再分別以氫氧化鈉溶液(1mol/L)、及去離子水洗至中性，乙醇清洗樹脂；

所述的分離載體聚苯乙烯-二乙烯基苯型樹脂的粒徑為30～80目；

(2)將步驟(1)中處理好的樹脂裝于層析柱中；

在此步驟(2)中，所述的層析柱的規格為(500～755)×(40～15)mm，高徑比為12.5∶1～55.5∶1；

(3)上樣前，用pH2.5～10.0的醋酸鹽或硫酸鹽溶液平衡層析柱12～36h；

在此步驟(3)中，所述的醋酸鹽為醋酸鈉或醋酸銨、硫酸鹽為硫酸鈉或硫酸銨；

(4)平衡結束后，將10mL發酵液加入層析柱上端吸附、并用醋酸鹽或硫酸鹽溶液進行兩次梯度洗脫，直至洗脫到終點，收集的洗脫液經旋轉蒸發后得到依替米星產品，并用高效液相色譜法(HPLC)檢測其純度。

在此步驟(4)中，所述的洗脫流速為：0.5～3.5mL/min；

在此步驟(4)中，所述的醋酸鹽為醋酸鈉或醋酸銨、硫酸鹽為硫酸鈉或硫酸銨；

在此步驟(4)中，所述的第一次洗脫的醋酸鹽或硫酸鹽的濃度為0.1～0.4mol/L、pH為3.5～10.0；

在此步驟(4)中，所述的第二次洗脫的醋酸鹽或硫酸鹽的濃度為0.1～0.4mol/L、pH為2.5～9.5。

(四)具體實施方案

實施例1

分離純化條件：分離載體聚苯乙烯-二乙烯基苯型樹脂的粒徑為80目，層析柱：500×40mm，上樣前用濃度為0.4mol/L、pH10.0的醋酸銨溶液平衡層析住12h，后取10mL發酵液進行上樣，第一次洗脫：0.4mol/L的醋酸銨溶液(pH10.0)，洗脫體積0.5個柱體積；第二次洗脫：0.3mol/L的醋酸銨溶液(pH6.5)，流速：3.5mL/min。按柱體積計，收集上樣后第1.5個柱體積的流出液，流出液經后處理得依替米星純化產品，依替米星的純度為98.8％，回收率為94.1％。

實施例2