[發明專利]高效液相色譜法測定組合物中巰基化合物含量的方法

有效

• 申請號: 201210225924.2
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102759586A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 陳志明;史家駿;倪睿;馬晉隆
• 申請（專利權）人: 上海現代藥物制劑工程研究中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 上海金盛協力知識產權代理有限公司 31242
• 代理人: 羅大忱

技術領域

本發明涉及組合物中巰基化合物含量的檢測方法，以及甲酸的新用途，更具體的，涉及甲酸作為穩定劑，在使用高效液相色譜分析法測定組合物巰基化合物的含量及穩定其有關物質的應用。

背景技術

巰基化合物中以二巰基類的有機化合物的實際應用較多見，它重要的代表是二巰丁二酸(DMSA)及其鈉鹽（Na-DMSA）、二巰丙磺酸及其鈉鹽（Na-DMPS）等，其主要的應用之一是作為金屬、類金屬解毒藥,用于治療銻、汞、砷、鉛、銅等急、慢性中毒及肝豆狀核變性(銅代謝障礙)。

隨著現代工業、交通、電子產業的迅速發展以及對重金屬的大量開采和應用，自然界中空氣、土壤、水源及食物中的生物鏈受到重金屬的污染日愈嚴重，人們對重金屬，尤其是鉛的接觸和吸收在逐漸增加。目前我國兒童鉛中毒的發生率為30%～50%。鉛中毒普遍性和嚴重性,目前已成為嚴重危害我國兒童健康的重大隱患之一，嚴重影響到兒童的發育和健康成長。

目前，臨床上最有代表性的重金屬解毒劑就是二巰丙磺酸鈉（Na-DMPS）、二巰丁二酸鈉(Na-DMS)、二巰丙醇（BAL）、二巰丁二酸（DMSA）等。其中二巰丁二酸因其口服有效，療效確切，毒性低，使用方便，已被國內外作為首選的重金屬解毒劑，用于解救鉛、汞、砷、鎳、銅等金屬中毒。國內臨床上解毒劑使用較多的劑型是注射液，例如二巰丙醇注射液、二巰丁二鈉注射液，而口服的目前只有二巰丁二酸成人膠囊，品種極少，尚未見適合兒童口服的專用劑型，所以開發此類藥品具有現實而迫切的意義。

與此同時，目前該類藥品在對應的質量控制標準領域也缺乏簡便易行的方法，這可能與產品本身因含有巰基而導致不穩定等因素有關。對臨床口服應用最廣泛的二巰丁二酸而言，現行除《中國藥典》2000版和2010版有提出質量標準外，各國藥典包括USP（31版）、BP（2008年）以及JP（15改正版）均未收載該品種，而且《中國藥典》上收載的質控標準都過于簡單，含量測定采用沉淀滴定法，因其降解的有關物質很不穩定而使質控標準的制定難度加大。

因為二巰類化合物分子結構中含有活潑的巰基官能團，尤其在含水的溶液中不穩定，其中一種不穩定現象之一包括巰基官能團分子內或分子間互相縮合形成雙硫鍵，例如申請人經質譜分析確定，二巰丁二酸在水中部分降解成雙硫化物（R-S-S-R）這種有關物質。而在采用反相高效液相色譜法分析該類化合物的含量和有關物質時，樣品供試液和流動相中必然含有水，這樣就無法避開產品的不穩定和有關物質增多的問題。顯然，在采用高效液相色譜分析過程中，如果因為流動相含水的問題以及樣品分析的前處理、測試過程中導致了二巰化合物含量的降低和有關物質的增大，那么很容易給二巰類解毒藥品例如膠囊、片劑等固體制劑產品本身固有的穩定性造成誤會，因為固體產品的含量偏低或有關物質的增大都可能是分析測試過程中造成的，進而無法體現產品本來固有的準確含量，造成測試數據的偏差。

以二巰丁二酸為例，現有的分析方法包括沉淀滴定法、高效液相色譜法（HPLC）、高效液相色譜熒光法(HPLC-FR)、高效液相色譜-質譜聯用法（LC-MS）等。

其中的沉淀滴定法，是中國藥典采用的方法，不但誤差大，對降解的雜質的測定也無能為力。熒光衍生化法：是基于HPLC的方法，但是對樣品的熒光化處理程序繁瑣，還需要配備專門的熒光檢測器。液質聯用法：操作成本高，也不便捷，不能普適于一般性藥廠對產品的質控要求。

一些文獻中也盡管采用單獨的HPLC法，但是經申請人試驗發現，對樣品測試的穩定性難以達到滿意的水平，在含水的流動相中巰基化合物容易部分降解，特別是隨著測定時間的延長，巰基化合物不斷的降解，容易導致測得的含量比實際的含量偏低。

發明內容

本發明的目的是公開一種高效液相色譜法測定組合物中巰基化合物含量的方法，以克服現有技術存在的上述缺陷。

本發明還涉及甲酸的新用途，在使用高效液相色譜分析法測定組合物中巰基化合物的含量時作為穩定劑的應用。

本發明所述的高效液相色譜法測定組合物中巰基化合物含量的方法，其特征在于，流動相為含有甲酸的水相與有機相的混合物，色譜柱為反相色譜柱，檢測器為紫外檢測器；

所述有機相為甲醇或乙腈；

所述水相是磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、離子對試液或純水；

有機相∶水相∶甲酸＝50～500∶949～460∶1～40，體積比；

以樣品供試液的體積計，樣品供試液中，甲酸體積百分比為0.5～10.0%；

樣品供試液的存儲環境優選為0～8℃的低溫存儲；