[發明專利]甲型H1N1流感病毒(2009)實時熒光核酸恒溫擴增檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210225251.0
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN103525945B
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 方亮;馮金夢;于明輝;居金良
• 申請（專利權）人: 上海仁度生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;G01N21/64
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 胡丹;徐迅

1.一種甲型H1N1流感病毒(2009)實時熒光核酸恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，包含有：

一條序列表中序列1所示的甲型H1N1流感病毒(2009)的靶標核酸的捕獲探針，所述靶標核酸為H1N1(2009) RNA，

一對用于在M-MLV反轉錄酶作用下產生H1N1(2009)靶標核酸的DNA拷貝的H1N1(2009)檢測引物T7和nT7，

一條用于與在T7 RNA聚合酶作用下根據所述H1N1(2009)靶標核酸的DNA拷貝產生的RNA拷貝特異結合的H1N1(2009)檢測探針和一條H1N1(2009)核苷酸序列競爭性的內標和內標檢測探針；

其中，所述捕獲探針的核苷酸序列如序列表中序列2所示：

CCAUU GUCUG AACUA GAUGU UAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AA；

所述H1N1(2009)檢測引物由T7引物和nT7引物組成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；

所述H1N1(2009)檢測探針的核苷酸序列如序列表中序列5所示：

CACGG UACCG AGAUA UGCCC GUG，并且H1N1(2009)檢測探針的5’端標記FAM熒光基團，3’端標記DABCYL淬滅基團；

所述競爭性內標可與捕獲探針特異性結合，并使用T7和nT7引物，所述競爭性內標是由序列表中序列7所示的H1N1(2009) IC RNA；

所述內標檢測探針的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端標記HEX熒光基團，3’端標記DABCYL淬滅基團，所述內標檢測探針存在于H1N1(2009)檢測液中；

并且，所述試劑盒含有由M-MLV反轉錄酶和T7 RNA聚合酶構成的酶。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述M-MLV反轉錄酶和T7 RNA聚合酶存在于一SAT酶液中，所述捕獲探針存在于一核酸提取液中，所述T7引物、nT7引物和H1N1(2009)檢測探針存在于一H1N1(2009)檢測液中。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含裂解液、核酸提取液、洗滌液、H1N1(2009)反應液、H1N1(2009)檢測液、SAT酶液、H1N1(2009)陽性對照、H1N1(2009)陰性對照和H1N1(2009)內標，其中：

裂解液：含硫酸銨和HEPES；

核酸提取液：含捕獲探針和磁珠；

洗滌液：含NaCl和SDS；

H1N1(2009)反應液：含dNTP和NTP；

H1N1(2009)檢測液：含T7引物、nT7引物、H1N1(2009)檢測探針和內標檢測探針；

SAT酶液：含M-MLV反轉錄酶和T7 RNA聚合酶這二種酶；

H1N1(2009)陽性對照；含甲型H1N1流感病毒(2009)HA基因的體外轉錄RNA稀釋物；

H1N1(2009)陰性對照：不含有甲型H1N1流感病毒(2009)靶標核酸（H1N1(2009) RNA）序列或不含有甲型流感病毒的溶液；

H1N1(2009)內標：H1N1(2009) IC RNA，其序列如序列表中序列7所示。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述H1N1(2009)陰性對照為生理鹽水。