[發明專利]一種重組的HEC-C8ORF4腫瘤細胞及其應用

有效

• 申請號: 201210224850.0
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102747037A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 羅文娟;張彥民;王雨楠;劉潔;王毓;郭遠文;任淑婷
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于抗腫瘤技術領域，涉及一種重組的HEC-C8ORF4腫瘤細胞及其應用。

背景技術

腫瘤相關基因C8ORF4（chromosome?8?open?reading?frame?4），位于8p11-12，其cDNA全長1327bp，其對應的Genbank號為NM_020130，也稱為甲狀腺癌相關基因1(thy-roid?cancer-1,TC-1)，是2000年由Chua等[Genomics,2000,69(3):342-347]從乳頭狀甲狀腺癌組織與正常甲狀腺組織的差異基因中篩選得到的新基因，廣泛表達于脊椎動物，高度表達于多種惡性腫瘤組織中。C8ORF4蛋白的二級結構絕大部分為α螺旋(>55%)，β折疊結構極少(<5%)，且沒有穩定的三級結構，屬于固有無序化蛋白質(天然無折疊蛋白質)中的一種[Cancer?Res,2004,64(8):2766-2773]。該基因編碼一種含有106個氨基酸的蛋白，該蛋白參與一些通路和成纖維細胞生長因子受體2（FGFR-2）通路的調節，促進腫瘤細胞的惡性行為，也參與NF-kB通路，調節炎性反應及熱休克反應。

有研究顯示胃癌細胞甲狀腺癌相關基因蛋白與Chibby結合，拮抗Chibby對某些信號通路的抑制作用，該研究證實其與腫瘤細胞的增殖、轉移等密切相關，說明該基因可能通過該信號通路參與胃癌細胞增殖、轉移（Cancer?Res.2006,66(2):723-8.）。隨后Gall等研究也發現甲狀腺癌相關基因參與影響某些信號通路（Protein?Sci.2007,16(11):2510-8.）。KIM等對臨床胃癌組織研究中發現，與胃癌分期、瘤細胞分化程度、侵襲、轉移密切相關（Clin?Cancer?Res.2006,12(11?Pt?1):3541-8.）。Yang等在研究乳腺癌中發現其通過（FGFR-2）及信號通路的調控，參與乳腺癌的發生（22-23）。

C8ORF4參與Wnt信號轉導通路的激活，可以促進多種癌基因表達上調，與甲狀腺癌、胃癌、乳腺癌等腫瘤的惡性轉化和進展有關。C8ORF4蛋白可以激活環磷腺苷依賴的蛋白激酶A和蛋白激酶C，也可以被它們磷酸化，從而形成一個環路相互調節。已有很多研究證明蛋白激酶A和蛋白激酶C是甲狀腺細胞主要的信號轉導通路[J?Mol?Biol,1999,294(5):1351-1362.Horm?Metab?Res?Suppl?1990,23(1):51-61]，表明TC-1蛋白與甲狀腺細胞的惡變密切相關。2007年Zeng等[Int?J?Cancer,2007,121(11):1265-1273]運用反轉錄病毒和慢病毒構建載體，轉導C8ORF4基因至人乳腺上皮細胞，發現乳腺上皮細胞錨著非依賴生長和生長因子非依賴性增殖良好，實驗發現該基因的表達與FGFR-2信號通路密切相關，應用高特異性FGFR/VEGFR抑制劑PD173074阻斷后，C8ORF4基因的表達受到明顯抑制，表明該基因是FGFR信號通路的下游基因。

發明內容

本發明解決的問題在于一種重組的HEC-C8ORF4腫瘤細胞及其應用，通過將C8ORF4基因轉染到HEC細胞中重組成C8ORF4穩定高表達的重組細胞，可應用于抗腫瘤藥物的篩選。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種重組的HEC-C8ORF4腫瘤細胞，以HEC細胞為宿主細胞，轉染含有C8ORF4基因片段并能夠在HEC細胞中表達的外源性載體。

所述的C8ORF4基因的外源性表達抑制HEC-C8ORF4腫瘤細胞的凋亡。

所述的外源性載體為p3FLAG-CMV-C8ORF4表達載體或pTRE3G-C8ORF4表達載體；

所述的p3FLAG-CMV-C8ORF4表達載體是將C8ORF4基因克隆到p3FLAG-CMV載體中；

所述的pTRE3G-C8ORF4表達載體是將C8ORF4基因克隆到pTRE3G載體中。

所述的重組的HEC-C8ORF4腫瘤細胞在抗子宮癌藥物的篩選中的應用。

所述的抗子宮癌藥物是以C8ORF4基因或C8ORF4蛋白為作用靶點的藥物。

所述的抗子宮癌藥物為抵抗或消除C8ORF4基因或C8ORF4蛋白抑制腫瘤細胞凋亡作用的藥物。

所述的抗子宮癌藥物為抑制C8ORF4基因表達的藥物。

所述的抗子宮癌藥物為與C8ORF4蛋白拮抗或結合的藥物。

與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果：