[發明專利]一種修復半月板撕裂的生物材料及其制備方法

有效

• 申請號: 201210224724.5
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102716515A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 田智泉
• 申請（專利權）人: 陜西博鴻生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/40
• 分類號: A61L27/40;A61L27/38;A61L27/36;A61L27/24
• 代理公司: 西安睿通知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 61218
• 代理人: 蔡龍寶

1.一種修復半月板撕裂的生物材料，其特征在于：由多層結構組成，即，依次由內層的脫細胞基質膜、中間層的多孔結構的膠原基質膜、外層的軟骨細胞形成的細胞層及細胞膜片構成；中間層與內層通過注模、流延或刮板工藝方法復合，外層通過軟骨細胞接種膠原基質膜制備復合結構，完成生物材料制備。

2.根據權利要求1所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于，依下述步驟完成：

步驟一、脫細胞基質膜的制備:該脫細胞基質膜選用動物源性脫細胞基質膜或人源性的脫細胞羊膜，以傳統工藝制備而成；

步驟二、具有多孔結構的膠原基質膜的制備：配置濃度為3～15mg/mL、pH值為3～6的膠原溶液，在脫細胞基質材料致密面通過注模、流延或刮板制備多孔膠原涂層；通過預凍溫度設定、冷凍速度和凍干工藝來調節膠原層孔徑大小，控制其孔徑大小在50～600μm之間；

步驟三、軟骨細胞形成的細胞層及細胞膜片的制備：

細胞層軟骨細胞接種：用軟骨細胞培養液浸潤步驟二制備的膠原基質膜后，按1×10⁴～2×10⁶/cm²密度接種軟骨細胞于膠原涂層多孔表面，靜置0.5～4小時，加入軟骨細胞培養液2～4mL，液面下培養2～4天，待細胞在多孔膠原基質膜內膠原纖維束貼附后，去除培養基；隨后，將接種軟骨細胞的膠原基質膜加入旋轉細胞維持培養液中，該旋轉細胞維持培養液為軟骨細胞培養液，進行旋轉培養，完成半月板損傷修復材料的制備：

細胞膜片制備：待完成細胞層接種后，翻轉膠原基質膜，置于細胞培養用孔板。采用同樣方法將軟骨細胞接種脫細胞基質材料疏松面表層，液面下培養?2～7天；后期旋轉培養參照步驟四完成制備。

3.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟1所述的動物源性脫細胞基質膜或人源性的脫細胞羊膜，是脫細胞小腸粘膜下層、脫細胞心包膜、脫細胞腹膜。

4.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟二所述調節膠原層孔徑，控制孔徑大小更優在200～400μm之間。

5.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟二所述的膠原溶液，是用牛跟腱、皮膚、鼠尾的動物源性材料制備而成。

6.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟二所述制備多孔膠原涂層的方法是：對復合后材料采用物理交聯或化學交聯，或者二者結合的方式；

所述物理交聯——采用紫外光照射交聯(4～15小時)或者重度脫水交聯（如乙醇、丙酮、異丙醇）；

所述化學交聯——采用異氰酸鹽類（HDI）、酰基疊氮類（DPPA）、醌類（NDGA）、碳化二亞胺（EDC）、環氧化合物（EC）及其低聚物、聚乙二醇等化學交聯劑，也可以采用葡萄糖、核糖等生物交聯劑；交聯材料采用PBS緩沖液、生理鹽水、純水清洗后，凍干，環氧乙烷滅菌后備用。

7.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟三所述軟骨細胞培養液,其組成為：在商用低糖型DMEM培養液中含有胎牛血清100ml/L、非必需氨基酸10ml/L、丙酮酸鈉1mmol/L、L-谷氨酰胺10-500μg/mL、維生素c（Vc）為50～100μg/mL、轉化生長因子（TGF-β₁）為5pg/mL～20ng/mL、堿性成纖維生長因子-2（bFGF-2）為5～50ng/mL，血小?板源性生長因子（PDGF-bb）為1～10ng/mL、胰島素樣生長因子（IGF-1）1～50ng/mL。

8.根據權利要求2所述修復半月板撕裂的生物材料的制備方法，其特征在于：步驟三所述的軟骨細胞，是軟骨細胞或可向軟骨細胞分化的間充質干細胞。