[發明專利]一種蛇足石杉內生菌及其應用

無效

• 申請號: 201210224637.X
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102907253A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 向極釬;帥超群;龍瀾;楊永康;覃大吉;殷紅清;李紅英;程新華;李亞杰
• 申請（專利權）人: 恩施清江生物工程有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04;C12P17/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物工程技術領域，特別是涉及一種蛇足石杉內生菌及其應用。?

背景技術

隨著世界老齡人口的迅速增加，早老性癡呆癥(AD)患者日益增多，已成為繼心血管疾病、腫瘤病后威脅老年人生命的第三大疾病。?

我國科學家劉嘉森等于1986年從民間草藥千層塔Huperzinaserrata(Thumb.)中分離得到的一種新型石松類生物堿有效單體——石杉堿甲（Huperzine?A）。近年來，國內大量臨床研究已證實，石杉堿甲是一種高效、高選擇性、可逆性的乙酰膽堿酯酶抑制劑，具有促進記憶再現和增強記憶保持的作用，對AD、血管性癡呆、智力低下、精神分裂癥等患者的學習、記憶障礙以及神經退行性疾病有很好的治療作用。?

目前，石杉堿甲主要來源于野生蛇足石杉全草，該植物對環境要求苛刻，分布星散，生長緩慢，資源更新周期長。據調查，中國作為蛇足石杉野生資源主要分布區，天然生物量為4656.6t，理論可采量為1604t，商業可采量不超過200t，而目前每年約需要至少2000t蛇足石杉干品，有限的自然資源，遠不能滿足市場對藥源的需求，可持續利用蛇足石杉資源是一個急待解決的問題，也是制約石杉堿甲開發的瓶頸。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種能夠通過微生物發酵產生石杉堿甲類似物。?

本發明提供一種蛇足石杉內生真菌分類學命名為裂褶菌（Schizophyllum?commune），命名為XQYS。?

本發明所述的蛇足石杉內生真菌是從石杉科植物蛇足石杉植物活體中采用內生真菌分離純化技術分離獲得。經微生物分類學鑒定為裂褶菌（Schizophyllum?commune）；該菌株己保藏，于2011年12月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No.?5510。保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編：100101。?

本發明所述菌株固體培養特征：在PDA?瓊脂培養基上菌落生長較快，25℃黑暗條件下培養7天，菌落直徑45-50?mm，白色，絮狀，隆起，背面淺褐色，無水溶性色素；?

本發明所述菌株液體培養特征：挑取少許菌絲接種于PD培養基，搖瓶培養，培養溫度28±1℃；培養第1-2天，有少許白色菌絲出現；培養第3-4天，形成直徑1-3mm白色菌絲球；培養第5-6天，形成直徑5-8mm白色菌絲球；培養第7天菌球直徑增大到12-18mm；培養5-6天后發酵液有濃郁酒香味。??

本發明所述菌株顯微特征：菌絲壁平滑或稍粗糙，分枝較少，具分隔，2.0-5.0μm寬，無鎖狀聯合現象。未見無性型產孢結構及孢子。?

本發明所述菌株rRNA基因序列（包括18S?rRNA?片段，ITS1、5.8S?rRNA、ITS2的全序列及28S?rRNA序列片斷）為：?

GTCAAAAGTTAGCGCACAAGTCGCTAGTCTCGGTCAAGAGACGGTTAGAAGCAGACTCCTATTGAAACTGACTAGGTCAGCCCCGAGATGGTCAACGACGTAGAAATTATCACATCGGAGACGCGATCCCGCAAGGGAAATCCGCTAATACATTTAAGAGGAGCTGGCTCCGTTAGGCTCCAGCAGACCTCCACTTCCAAGCCACTCTCGAGACCGAAGTCAAAAGAGGGTTGATGGTATTTAATGACACTCAAACAGGCATGCCCCTCGGAATACCAAAGGGCGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGTCGAAAGTTGTATTAACTTTTTAGGGTCTGTCAAGACCATGATTACATTCGTTAACATACTTTAAGGTGTGAGGTAGACGTAGTCAACCGCCGCCCGTGAAGGCTTTGGGACTACATAAGGTGCACAGGATCAGAACAAGATGAACTTGTTTGATTCGTTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTAC?

本發明的另一目的是提供了蛇足石杉內生真菌的應用。?

本發明所述菌株，經發酵可得石杉堿甲類似化合物，其工藝包括菌種活化、種子培養、發酵培養、總生物堿的提取、HPLC分析、石杉堿甲類似化合物步驟。各工藝步驟參數如下：?