[發明專利]一種用于克隆含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的DNA分子及克隆方法

有效

• 申請號: 201210223195.7
• 申請日: 2012-06-29
• 公開（公告）號: CN102732525A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 王建南;楊云星;黃海燕;李明忠;盧神州
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

1.一種用于克隆含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的DNA分子，其特征在于，其編碼鏈的序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種克隆來自于野蠶絲素蛋白的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因重復序列的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：合成編碼鏈序列如SEQ?ID?NO：1所示的DNA分子；所述DNA分子的編碼鏈序列的5’端含有BglII的粘末端堿基，3’端具有BamHI的粘末端堿基，所述BglII位點的上游還具有AgeI的粘末端堿基；

步驟2：取所述DNA分子與pSLFA1180FA質粒連接獲得轉化質粒，轉化感受態細胞，篩選陽性克隆、提取質粒、BglII/BamHI雙酶切、收集小片段即得。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述連接具體為取限制性核酸內切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA質粒，收集大片段，與編碼鏈序列如SEQ?ID?NO：1所示的DNA分子經T4連接酶連接。

4.一種克隆單倍的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因序列的方法，其特征在于，取限制性核酸內切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA質粒收集大片段，與編碼鏈序列如SEQ?ID?NO：1所示的DNA分子經T4連接酶連接，獲得單倍的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因克隆；轉化感受態細胞，篩選陽性克隆、提取質粒、BglII/BamHI雙酶切、收集小片段即得。

5.一種克隆雙倍的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因序列的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：取限制性核酸內切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA質粒，收集大片段P1，與編碼鏈序列如SEQ?ID?NO：1所示的DNA分子經T4連接酶連接，獲得單倍的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因克隆pSL-AYR1；

步驟2：取限制性核酸內切酶BglII/EcoRI消化所述單倍克隆pSL-AYR1，收集小片段P2；取限制性核酸內切酶BamHI/EcoRI消化所述單倍克隆pSL-AYR1，收集大片段P3；取所述小片段P2與所述大片段P3經T4連接酶連接，獲得雙倍的含精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸的多肽的基因克隆pSL-AYR2；

步驟3：轉化感受態細胞，篩選陽性克隆、提取質粒、BglII/BamHI雙酶切、收集小片段即得。