[發(fā)明專利]草烏甲素的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210223041.8
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102775349A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈勇;艾洪蓮;趙大克;張麗梅;鄭麗;李曉波;字淑慧
• 申請（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D221/22
• 分類號: C07D221/22
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于天然藥物制備領(lǐng)域，具體涉及高純度草烏甲素的制備方法。

背景技術(shù)：

草烏甲素（Bulleyaconitine?A,?分子式為C₃₅H₄₉NO₁₀,?分子量為643.77）具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛抗炎等藥理活性，試驗證實草烏甲素屬于中樞性鎮(zhèn)痛劑，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性且無成癮性。目前以草烏甲素為原料的草烏甲素片劑、口服液、注射劑等劑型用于臨床，主要用于治療癌癥晚期疼痛、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肩周炎、肩臂痛、落枕、骨關(guān)節(jié)炎、良性關(guān)節(jié)痛、腰及四肢關(guān)節(jié)扭傷、挫傷、腰肌勞損及腰背痛、坐骨神經(jīng)痛、肌纖維炎及肋軟骨炎、帶狀皰疹、感冒頭痛、牙痛等。

現(xiàn)有技術(shù)中，中國專利200910094477.?X公開了制備草烏甲素的方法為酸醇提取，純化時洗脫劑為石油醚/環(huán)己烷-丙酮-二乙胺；CN101830849?A公開了制備草烏甲素的方法為草烏的塊根用堿溶液提取，純化時洗脫劑為石油醚/汽油/正己烷-乙酸乙酯-二乙胺/三乙胺。這些方法涉及的洗脫溶劑均為三元系統(tǒng)，溶劑回收后極性發(fā)生改變，不容易回收再利用，成本高且方法步驟復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容：

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明通過科學(xué)實驗，旨在發(fā)明一種提取率高、毒性低且適合工業(yè)化生產(chǎn)的草烏甲素的制備方法。

下述的技術(shù)方案是用來實現(xiàn)上述的發(fā)明目的：

一種草烏甲素的制備方法，包括提取、萃取分離、柱層析分離純化、結(jié)晶純化步驟，所述的提取是將干燥的直緣烏頭塊根粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇或乙醇進(jìn)行滲濾提取，甲醇或乙醇的用量為藥材量的8~15倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀；所述的萃取分離是將提取步驟所得的膏用1.5%的鹽酸溶液溶解，過濾，酸水液繼用25%濃氨水調(diào)pH至9，堿液用石油醚萃取2次，繼用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯萃取部分并減壓回收至膏狀，得粗總堿；所述的柱層析分離純化是將萃取分離步驟所得的粗總堿，用氯仿溶解吸附于1.5倍量硅膠拌樣，室溫?fù)]干，進(jìn)行硅膠柱層析，以50-20:1-2的石油醚:二乙胺進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分；所述的結(jié)晶純化是將柱層析分離步驟所得的主要含草烏甲素的部分，用丙酮或甲醇或乙醇溶解進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，得草烏甲素純品。

上述方法中，提取步驟所用的甲醇或乙醇的量為藥材料量的8-10倍。

上述方法中，柱層析分離純化步驟中所用的硅膠為200-300目，柱層析的硅膠用量為樣品量的10?-?30倍。

本發(fā)明的方法以毛茛科烏頭屬植物直緣烏頭（Aconitum?transsectum?Diels.）塊根為原料，采用甲醇或乙醇滲濾提取，純化時洗脫劑為石油醚-二乙胺，此方法為二元系統(tǒng)，較現(xiàn)有技術(shù)的三元系統(tǒng)相比，溶劑更容易回收再利用，極性大小的調(diào)節(jié)更容易趨于一致，從而大大減低了生產(chǎn)成本。此方法更為簡單，流水化程度更高，更適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明制備方法所得到的草烏甲素的HPLC檢測結(jié)果圖，草烏甲素含量檢測采用2010年版《中國藥典》的方法；

圖2為本發(fā)明制備方法所得到的草烏甲素的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式：

下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實施例進(jìn)一步對本發(fā)明作詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。

實施例1：

本發(fā)明提供的草烏甲素的制備方法具體包括以下工藝步驟：

（1）提取

將干燥的直緣烏頭（Aconitum?transsectum?Diels.）塊根粉碎，適量甲醇浸潤24小時，用甲醇進(jìn)行滲濾提取，甲醇的用量為藥材量的8~15倍，合并滲濾液，濃縮至膏狀。

（2）萃取分離

將步驟（1）所得的膏用1.5%的鹽酸溶液溶解，過濾，酸水液繼用濃氨水（25%）調(diào)pH至9，堿液用石油醚萃取2次，繼用氯仿或乙酸乙酯萃取3次，合并氯仿或乙酸乙酯并減壓回收氯仿至膏狀，得粗總堿。

（3）柱層析分離純化

將步驟（2）所得的粗總堿，用氯仿溶解吸附于1.5倍量硅膠拌樣，室溫?fù)]干，進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚：二乙胺（50-20：1-2）進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，以草烏甲素為對照用薄層色譜（TLC）跟蹤檢測，合并主含草烏甲素的流份，回收溶劑至干，得到主要含草烏甲素部分。

（4）結(jié)晶純化