[發(fā)明專利]一種替考拉寧單組份的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210221634.0
• 申請日: 2012-06-30
• 公開（公告）號: CN102718843A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設計）人: 張雪霞;任風芝;段寶玲;董愛華;蔣沁;張志江;李曉露;李寧;王海燕;朱秀良;林毅;陳書紅;成曉迅;李麗紅
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團新藥研究開發(fā)有限責任公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/36;C07K1/22;C07K1/16
• 代理公司: 石家莊眾志華清知識產權事務所(特殊普通合伙) 13123
• 代理人: 張明月

1.一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：該方法包括下述步驟，

步驟1）預處理：在常溫條件下，在替考拉寧發(fā)酵液中加入堿溶液，調節(jié)pH至11.0~13.0；將發(fā)酵液固液分離，所得濾液用酸溶液調節(jié)pH至7.0~7.5，得到替考拉寧濾液；

步驟2）脫色：將替考拉寧濾液導入大孔脫色樹脂進行脫色，得到替考拉寧脫色液；

步驟3）吸附：將替考拉寧脫色液導入大孔吸附樹脂進行吸附，再用溶劑解吸，所得替考拉寧解吸液，經濃縮、結晶、干燥，得到替考拉寧的粗提物；

步驟4）層析：將替考拉寧粗提物用水溶解，注入聚合物微球層析柱進行層析，然后用不同濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，分別收集各段洗脫液，得到含有TA_2-1、TA_2-2、TA_2-3、TA_2-4、TA_2-5和TA_3-1六種單組份的替考拉寧單組份洗脫液；

步驟5）將六種替考拉寧單組份洗脫液分別濃縮、結晶、干燥，得到替考拉寧的單組份精粉。

2.根據權利要求1所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：所述步驟1）中堿溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液；酸溶液為鹽酸、硫酸或有機酸溶液的其中一種。

3.根據權利要求1?所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：所述步驟2）中大孔脫色樹脂為LX-98、LSA-700B、DM130或D303樹脂的其中一種。

4.根據權利要求1所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：所述步驟3）中大孔吸附樹脂為HZ816、HZ801、D101或D312樹脂的其中一種；所述溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，溶劑濃度為40%~50%。

5.根據權利要求1所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：所述步驟4）中層析介質為聚合物微球PS25-300、PS30RPC-300或PSA30-300的其中一種；所述洗脫溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，洗脫溶劑濃度為25%~60%。

6.根據權利要求1~5任一項所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于：所述步驟4）中包括如下步驟，

步驟A)?將替考拉寧粗提物用蒸餾水溶解，注入聚合物微球層析柱進行層析，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫；

步驟B）根據HPLC對替考拉寧中各單組份的檢測結果，分別收集TA_3-1、TA_2-1和TA_2-2的洗脫液；得到TA_3-1、TA_2-1和TA_2-2三種替考拉寧單組份洗脫液；

步驟C）根據HPLC對替考拉寧中各單組份的檢測結果，分別收集TA_2-2與TA_2-3的HPLC峰面積百分比為1：2的混合液，TA_2-4與TA_2-5峰面積百分比為1：1的混合液；

步驟D）將步驟C）中得到的兩種混合液濃縮至混合液濃度為100g/L，再次注入聚合物微球層析柱進行層析分離，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，根據HPLC檢測結果，分別收集TA_2-3?、TA_2-4和TA_2-5的洗脫液，得到TA_2-3?、TA_2-4和TA_2-5三種替考拉寧單組份洗脫液。