[發(fā)明專(zhuān)利]一種類(lèi)芽孢桿菌、選育方法及其生產(chǎn)β-葡聚糖酶及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210219671.8
• 申請(qǐng)日: 2012-06-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103509730A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張建法;程瑞;徐淋香
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/04;C12N9/24;C12R1/01
• 代理公司: 南京理工大學(xué)專(zhuān)利中心 32203
• 代理人: 朱顯國(guó)

1.一種類(lèi)芽孢桿菌，其特征在于它于2012年5月30日保藏于“中國(guó)典型微生物保藏中心”，保藏登記號(hào)為CCTCC?NO：M2012196，命名為類(lèi)芽孢桿菌S09，分類(lèi)命名為類(lèi)芽孢桿菌（Paenibacillussp），該菌的16SrRNA基因序列在Genbank上的登錄號(hào)為JQ945736。

2.一種類(lèi)芽孢桿菌的選育方法，其特征是所述方法包括以下步驟：

（1）配制篩選培養(yǎng)基：將質(zhì)量濃度為KH₂PO₄?0.5-1‰，NaNO_3?2-3‰，CaCl₂?0.07-0.15‰，MgSO₄?0.1-0.3‰，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.007-0.015‰，索拉膠3-8‰溶于H₂O中，pH為6-7.5，固體培養(yǎng)基添加0.9-1.5%的瓊脂；

（2）將培養(yǎng)基于115°C~121°C滅菌15-30分鐘，然后冷卻；

（3）將采集的用于篩選的土樣或水樣加入液體培養(yǎng)基中，于28-37°C搖床中振蕩培養(yǎng)2-4天用于富集索拉膠降解菌，培養(yǎng)基中索拉膠粘度降低的菌液用于后續(xù)篩選；

（4）將富集培養(yǎng)的菌液做十倍梯度稀釋?zhuān)坎嫉焦腆w篩選培養(yǎng)基上，于28°C?~37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-4天；

（5）將平板上的單菌落做好標(biāo)記，影印至新的固體培養(yǎng)基上，將原平板上的菌落刮下，用質(zhì)量濃度為1-3%?CTAB溶液覆蓋平板15-30min后觀察；

（6）將形成透明圈的菌落挑出，重新接種到液體篩選培養(yǎng)基中，于28-37°C搖床中振蕩培養(yǎng)2-4天，將使培養(yǎng)基中索拉膠粘度下降的菌篩出并保存。

3.一種用權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌生產(chǎn)的β-葡聚糖酶，其特征在于所述的β-葡聚糖酶通過(guò)以下步驟制成：

（1）種子培養(yǎng)基為：質(zhì)量濃度為0.3-0.5%的索拉膠，pH6-7，110-121°C高壓滅菌15-30min，接種固體培養(yǎng)基上的類(lèi)芽孢桿菌S09單菌落，28-37°C振蕩培養(yǎng)2-3天；

（2）發(fā)酵培養(yǎng)基為：質(zhì)量濃度為0.5-1%的索拉膠,?pH6-7，110-121°C高壓滅菌15-30min；按2-4%接種量接種種子液，28-37°C，200-225rpm，振蕩培養(yǎng)24-36h，7000rpm，10-20min離心去除菌體，收集上清液，得葡聚糖酶的粗酶液。