[發(fā)明專利]低氧誘導(dǎo)因子3α基因作為牛優(yōu)良超數(shù)排卵性狀分子標(biāo)記的鑒定方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210219656.3
• 申請日: 2012-06-29
• 公開（公告）號: CN102719545A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張嘉保;姜昊;鄧瓊;余文莉;李樹靜;陳承禎;俞先鋒;袁寶;張國梁;賈麗坤
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué);北京安伯胚胎生物技術(shù)中心;吉林黑毛牛業(yè)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及牛低氧誘導(dǎo)因子3α基因片段的克隆以及其在牛超數(shù)排卵性狀標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

Mapletoft等(Mapletoft?RJ等，Assisted?reproductive?technologies?in?cattle：a?review.Rev?Sci?Technol?2005，24：393-403)報道，超數(shù)排卵在人類及動物胚胎移植領(lǐng)域是最有意義的技術(shù)之一，已被應(yīng)用多年。此技術(shù)更是全世界范圍內(nèi)牛胚胎生產(chǎn)及胚胎移植的重要組成部分。全世界范圍內(nèi)每年有超過50萬枚胚胎是通過此技術(shù)獲得的。在牛胚胎移植過程中，多選擇正常發(fā)育的桑葚胚(Morula)檔次以上的可用胚胎(優(yōu)質(zhì)的桑葚胚和囊胚)進行移植。因此，利用此技術(shù)獲得更多的可用胚胎，對牛胚胎生產(chǎn)和移植具有重要的意義。

Mapletoft等(Mapletoft?R?J等，Recent?advances?in?the?superovulation?in?cattle.Reprod?Nutr?Dev?2002，42：601-611)報道，遺傳因素可能是影響超數(shù)排卵效果的因素之一。Fauser等(Fauser?B?C等，Predictors?of?ovarian?response：progress?towards?individualized?treatment?in?ovulation?induction?and?ovarian?stimulation.Hum?Reprod?Update?2008，14：1-14)報道，候選基因的單核苷酸遺傳多態(tài)性可能成為預(yù)測卵巢反應(yīng)的首選因素。

Maynard?M?A等報道(Maynard?M?A等，Multiple?splice?variants?of?the?human?HIF-3α?locus?are?targets?of?the?von?Hippel-Lindau?E3?ubiquitin?ligase?complex.J?Biol?Chem.2003，278：11032-11040)低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF-3α)在人胎盤和心肌中具有很高的表達量。Genbacev?O等報道(Genbacev?O等，Human?cytotrophoblast?expression?of?the?von?Hippel-Lindau?protein?is?down-regulated?during?uterine?invasion?in?situ?and?upregulated?by?hypoxia?in?vitro.Dev.Biol.2001，233：526-536)由于通過母體血液經(jīng)胎盤提供給胎兒的氧氣量很有限，胚胎便逐漸暴露在低氧環(huán)境下，這時HIF-3α不會再發(fā)生降解，并大量聚集在細胞核內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)作用。Toshiharu?Yamashita等(Toshiharu?Yamashita等，Abnormal?Heart?Development?and?Lung?Remodeling?in?Mice?Lacking?the?Hypoxia-Inducible?Factor-Related?Basic?Helix-Loop-Helix?PAS?Protein?NEPAS.Molecular?and?cellular?Biology.2008，4(28)：1285-1297)也報道，在胚胎和新生兒階段，HIF-3α表達也發(fā)生顯著的變化。Formenti?F等(Formenti?F等，″Regulation?of?human?metabolism?by?hypoxia-inducible?factor.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.107(28)：12722-12727)證明在哺乳動物中，缺失HIF可以導(dǎo)致胎兒的死亡。同時，其在調(diào)節(jié)人體新陳代謝中也起著核心作用。

因此，低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF3A)基因可以被選定為候選基因，其單核苷酸遺傳多態(tài)性可能為動物繁殖和生產(chǎn)性能的輔助選擇提供分子標(biāo)記。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克隆牛低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF3A)基因片段，鑒定其特定的突變位點以作為牛優(yōu)良超數(shù)排卵性狀相關(guān)基因多態(tài)性的檢測方法，為牛標(biāo)記輔助育種提供一種有意義的分子標(biāo)記。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種通過特異性引物和PCR(Polymerase?Chain?Reaction)方法獲得的牛超數(shù)排卵性狀相關(guān)基因低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF3A)的379bp序列，如表SEQ?ID?NO：1所示。