[發(fā)明專利]人白介素22在制備肝移植排斥反應的標志物中的應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210218622.2
• 申請日: 2012-06-28
• 公開（公告）號: CN102735847A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設計）人: 張軼;倪兵
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權代理事務所 11308
• 代理人: 秦力軍

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)學領域，特別涉及肝移植排斥反應的標志物。

背景技術

肝移植手術，是指通過手術植入一個健康的肝臟到患者體內(nèi)，使終末期肝病患者肝功能得到良好恢復的一種外科治療手段。按照供肝種植部位不同，可分為原位肝移植術和異位肝移植術。原位肝移植(OLT)已成為肝臟外科手術的成熟技術，并且對許多終末期肝病患者而言，它是唯一有效的治療手段。盡管有免疫抑制劑的成功應用，而由浸潤的淋巴細胞、單核細胞和其他炎癥細胞引起的急性移植物排斥反應，依舊是早期供體損傷及移植后生存率的主要危險因素之一。有研究表明，排斥反應中起支配作用的IFNγ對移植物損傷并非是不可或缺的，暗示還有其他因子參與引起排斥反應的炎癥反應。最新研究表明，TH17細胞參與移植排斥反應的免疫應答。IL-22是IL-10家族的成員之一，主要由TH17細胞、TH22細胞、NK細胞及淋巴組織誘導細胞(LTi)等產(chǎn)生，IL-22主要作用于皮膚、肝臟及腎臟，發(fā)揮固有免疫、損傷保護及促進再生的作用。IL-22對肝臟有著保護及促炎的雙重作用，研究證明IL-22對肝部分切除后的肝細胞再生起重要的促進作用，最新的數(shù)據(jù)證明IL-22參與肝臟缺血再灌注損傷的保護作用。推測IL-22參與肝移植術后的肝細胞再生及缺血再灌注等作用。但是，至今還沒有IL-22(人白介素22)參與移植排斥反應的免疫應答的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供人白介素22的新應用，該應用為判斷肝移植排斥反應提供了新的思路。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為：

人白介素22在制備肝移植排斥反應的標志物中的應用。

進一步，所述肝移植排斥反應為原位性肝移植排斥。

進一步，人白介素22的蛋白在制備肝移植的第1-3天肝移植排斥反應的標志物中的應用。

進一步，人白介素22的mRNA在制備肝移植排斥反應的標志物中的應用。

上述技術方案是通過如下實驗來證實其功能的：成功建立大鼠原位肝移植動物模型，分為排斥組和耐受組(各15只)，取術后1，3，5，7天大鼠血漿及肝組織標本，應用免疫組化染色、Western?blot及熒光定量PCR檢測其肝組織內(nèi)IL-17(白介素-17)及IL-22(白介素-22)的細胞、蛋白及mRNA的表達情況。結(jié)果顯示排斥組IL-17血漿濃度顯著高于耐受組；在肝組織中，IL-17及IL-22的淋巴細胞陽性率、蛋白表達水平及mRNA表達水平排斥組顯著高于耐受組。由此可以證實人白介素22在制備肝移植排斥反應的標志物中的應用。現(xiàn)有技術中：IL-17可作用于自身免疫疾病和病原體的防御還參與移植物排斥反應，在人及動物的腎臟、心臟及肺移植中發(fā)現(xiàn)IL-17水平的升高。在肝移植中，有臨床研究表明TH17相關因子IL-17及IL-23在肝移植術后的患者血清中顯著增高。同IL-17相比，IL-17在排斥組肝組織內(nèi)術后第1天及第3天升高明顯，并在隨后的5、7天內(nèi)逐漸降低，IL-22在排斥組術后第1天升高明顯并從第3天起逐漸下降。排斥組的IL-17和IL-22表達相比于耐受組在術后均有統(tǒng)計學意義。

附圖說明

圖1為HE組織切片，其中，TOL是指耐受組，REJ是指排斥組。

圖2為HE組織切片Banff的RAI評分分析圖。

圖3為大鼠肝移植模型建立后的肝功能指標變化情況分析圖，其中，A為以ALT為指標，B為以AST為指標。

圖4為免疫組化顯示移植后1，3，5，7天大鼠肝組織中IL-17及IL-22的變化情況。

圖5為Western?blotting檢測移植后1，3，5，7，天大鼠肝組織內(nèi)的IL-17、IL-22。

圖6為Western?blotting檢測移植后1，3，5，7，天大鼠肝組織內(nèi)的IL-17、IL-22變化分析圖，其中A為IL-17的變化分析圖，B為IL-22的變化分析圖，分析圖中，橫坐標為時間，縱坐標為用紫外分光光度計測定的相對濃度(與內(nèi)參GAPDH比值)。

圖7為移植后1，3，5，7天大鼠肝組織中IL-17、IL-22的mRNA的變化分析圖，其中，a為IL-17的變化分析圖，b為IL-22的變化分析圖，橫坐標為時間，縱坐標為mRNA的表達水平(與內(nèi)參β-Actin比值)。

具體實施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術方案和有點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。