[發(fā)明專利]一種干燥綜合征的抗原表位及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210216278.3
• 申請日: 2012-06-27
• 公開（公告）號: CN102796174A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設計）人: 楊光;栗占國;高亞萍;柳川;穆榮;董潔;劉玉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;北京大學人民醫(yī)院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;G01N33/68
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

技術領域

本發(fā)明屬于免疫學診斷技術領域，具體涉及一種干燥綜合征的抗原表位及其應用。

背景技術

干燥綜合征（Sj?gren’s?Syndrome，SS）是一種以侵及淚腺和唾液腺等外分泌腺為特征的全身性自身免疫疾病。該病最常見的臨床表現(xiàn)為眼干、口干，并可累及肺、腎臟、淋巴系統(tǒng)、血管及肝臟等器官。此病無明顯的地區(qū)分布差異，可發(fā)生于任何年齡，以40-60歲，特別是絕經(jīng)后的女性居多，男女之比為1:9。在我國的患病率為0.77%，在老年人群中的患病率高達4%，全國有近1000萬患者。干燥綜合征可分為原發(fā)性干燥綜合征?(Primary?Sjogren’s?syndrome)和繼發(fā)性干燥綜合征?(Secondary?Sjogren’s?syndrome)兩類。該病單獨發(fā)生時，稱為原發(fā)性干燥綜合征；與其它診斷明確的自身免疫性疾病如類風濕關節(jié)炎（rheumatoid?arthritis,?RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic?lupus?erythematosus,?SLE）等合并存在時，稱為繼發(fā)性干燥綜合征。

近年來，人們對干燥綜合征的病因及發(fā)病機理進行了大量研究，但至今無突破性進展。目前在臨床診斷主要依據(jù)臨床癥狀和唇腺活檢及腮腺造影等有創(chuàng)檢查明確診斷，由于患者的醫(yī)從性差，常常延誤診斷，并喪失最佳的治療時機。雖然診斷標準中包括血清抗SSA（Ro）抗體、抗SSB（La）抗體和抗核抗體(ANA)檢測，但它們均特異性和敏感性低，不能作為理想的診斷指標。因此，尋找一種敏感性強、特異性高而又簡便易行的血清學檢測方法，對干燥綜合征的早期診斷及治療具有重要意義。

大量自身抗體的出現(xiàn)是自身免疫性疾病的重要特征之一，但由于其發(fā)病機制尚不明確，難以直接利用自身抗原檢測抗體。抗原表位（epitope）是抗原分子中識別、結合抗體的基礎，因此是檢測抗體的實際有效組分。以抗原表位肽或其模擬肽（mimotope）作為診斷工具有以下幾個優(yōu)勢：1）可以提高診斷的靈敏度和特異性，避免了生物大分子易產生的非特異性結合[Deroo?S?et?al?(2001)?Comb?Chem?High?Throughput?Screen?4:?75?-?115]；2）擴大疾病診斷的范圍，對于研究較少或難以體外應用的自身抗原如核酸抗原、多糖抗原、脂類抗原，以模擬肽作為天然抗原的替代物進行診斷，也可以獲得與天然抗原表位一致的結果[Bruce?G?（1997）?Proc?Natl?Acad?Sci?USA?94：1955?–?1960；?Jinaping?Q?et?al?(1999)?Hyridoma?18(1)：103?-?109]；3）多肽制備、應用的成本低、易于質控。因此，自身抗原表位肽或其模擬肽[Meloen?RH?et?al?(2000)?J?Mol?Recognit?13:?352?-?359?]的獲得是制備自身抗體的多肽檢測試劑的基礎。基于噬菌體肽庫技術的抗原表位確定技術，僅需要以患者血清樣本為靶標，而無需天然的自身抗原信息，可以實現(xiàn)快速和簡便篩選，并且成本低、結果可信度高。噬菌體肽庫技術的另一個突出特點是，通過篩選可以同時獲得某一疾病特異性的多個抗原表位肽，它們可能代表了天然抗原的主要免疫顯性基團。天然生物大分子抗原通常由多個抗原表位組成，其中有一些在免疫反應中起著主要作用，被稱為“免疫顯性基團”，針對完整抗原的抗體主要是針對這些表位的多種“單克隆抗體”組成。以SS患者血清樣品為靶標，通過噬菌體肽庫篩選，獲得SS特異性的抗原表位肽，是獲得新型診斷試劑的基礎。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種干燥綜合征的抗原表位。

本發(fā)明的目的還在于提供上述抗原表位的核苷酸序列。

本發(fā)明的目的還在于提供一種檢測干燥綜合征的試劑盒。

本發(fā)明的目的還在于提供干燥綜合征的抗原表位在制備診斷干燥綜合征的藥物中的用途。

發(fā)明人從10例SS患者血清中制備和純化得到IgG，然后以線性十二肽庫與抗體孵育，經(jīng)篩選獲得了與抗體特異結合的噬菌體克隆。之后通過ELISA確定陽性噬菌體克隆，測定陽性噬菌體克隆展示肽序列。化學合成其中的一個表位肽，命名為SSP,?通過ELISA檢測與患者血清的反應情況，表明其能特異的與患者血清中的IgG結合，而不與健康人血清反應。

一種干燥綜合征的抗原表位，該抗原表位為多肽，其氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO:?1所示。

編碼上述干燥綜合征的抗原表位的核苷酸序列。