[發明專利]植物硒形態的檢測方法

無效

• 申請號: 201210215457.5
• 申請日: 2012-06-19
• 公開（公告）號: CN102721779A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 楊萍;湯鋆;桂仁意;程建中;吳雅瑩
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

1.一種植物硒形態的檢測方法，其特征是按照如下步驟進行：

(1)檢測前期的準備：

①選用的設備：美國waters公司1525型高效液相色譜儀HPLC，美國Thermo?Fisher?Scientific公司XSeries2電感耦合等離子體質譜儀ICP-MS，離心機，超聲波儀，凍干機；

②HPLC與ICP-MS采用0.25mm聚醚醚酮PEEK管連接；

③選用的試劑：鹽酸為分析純，檸檬酸為色譜純，4℃保存的鏈霉蛋白酶E，以上試劑均采購于上海生物工程有限公司；硒代胱氨酸(SeCys₂)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)、亞硒酸鈉(Na₂SeO₃)和硒酸鈉(Na₂SeO₄)，以上五個硒標準品的純度≥98％，均采購于Sigma公司；

④五個硒標準品均用0.1mol/L?HC1稀釋為100μg/L的混標溶液，4℃保存；試驗中所有試劑的配制均采用MΩ為18.2超純水；

(2)建立高效液相色譜與電感耦合等離子體質譜即HPLC-I?CP-MS聯用技術：

①HPLC的操作參數：采用Hamilton?PRP-X100、250mm×4.1mm×10μm的陰離子柱為色譜柱，流動相為PH4.72?5m?mol/L的檸檬酸，進樣量為50μL，流速為1.0mL/min；

②ICP-MS的操作參數：采用射頻功率為1300W，冷卻氣流速為13.0L/min，輔助氣流速為0.8L/min，霧化氣流速為0.85L/min，碰撞反應池為CCT模式，氫氦混合氣比例為8∶92，混合氣流速為6.95mL/min，測量同位素為⁷⁸Se；

(3)建立五種硒形態標準溶液的色譜圖：取100μg/L硒混標溶液，采用步驟(2)HPLC-ICP-MS的操作參數進行檢測，以保留時間Time/ms為橫坐標，響應值Intensity/cps縱坐標，建立五種硒形態標準溶液的色譜圖；

(4)植物硒形態的提取與檢測：

①選取植物材料用超純水洗凈，進行冷凍干燥、粉碎、過40目篩，并測出含水量，樣品密封放在4℃保存備用；

②酶提取法：取樣品粉末0.1g放入15mL離心管中，加入20mg鏈霉蛋白酶E，再加入3mL超純水后，37℃超聲提取30min，14000r/min離心30min，取上清液，過0.22μm濾膜2次，待測；

③待測樣品按照步驟(2)建立的HPLC-ICP-MS聯用技術進行硒形態的檢測，以保留時間Time/ms為橫坐標，響應值Intensity/cps縱坐標，建立樣品硒形態色譜圖，以采集圖譜中所示樣品各硒形態對應峰面積計算硒形態的含量：