[發明專利]一種突變型Taq酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201210214958.1
• 申請日: 2012-06-27
• 公開（公告）號: CN103509767A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 范凌云;李泓彥;鄧艷華
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/10;C12R1/19
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 羅瑤

技術領域

本申請涉及生物技術領域，具體地，涉及一種突變型Taq酶及其制備方法。

背景技術

1969年在美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離得到一種水生棲熱菌(Thermus?aquaticus)YT-1，它生長在70℃-75℃極富含礦物質的環境中。1976年，A.Chien從中分離純化到了耐熱的Taq?DNA聚合酶（簡稱，Taq酶）。隨著PCR技術的推廣和應用，對Taq?DNA聚合酶性質的研究日漸重要。RandallK.Saiki首度將其應用于PCR技術,使得PCR過程實現了自動連續循環。

Taq?DNA聚合酶是一種耐熱的DNA聚合酶，屬于DNA聚合酶I家族。酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,分子量為94kD。在70-75℃時具有最高的生物學活性。在92.5℃酶活性可持續130min，95℃持續40min，97.5℃5-6min可保持約50%的酶活性。

然而，隨著醫藥科技的發展，對聚合酶性能的要求不斷提高，原有的野生型Taq?DNA聚合酶已經不能滿足特殊PCR技術的要求了，如用于功能基因的定點突變技術要求聚合酶具有較高的熱穩定性等等。由于原有Taq?DNA全酶結構上的缺陷，使其在許多應用領域受到限制。因此需要對天然Taq進行進一步的改造來改善Taq?DNA聚合酶的耐熱性等，以適應工業生產及科研應用需求。

發明內容

本申請的目的在于提供一種突變型Taq酶，此外本申請還提供該突變型Taq酶的制備方法。

根據上述目的，本申請提供一種突變型Taq酶，其氨基酸序列為SEQ?NO.2所示。

本申請還進一步公開了可編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列。

具體的，上述核苷酸序列可為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

上述核苷酸序列還可為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列進行1個或幾個核苷酸取代而得到的密碼子同義突變的核苷酸序列。

本申請提供了一種載體，該載體包含可編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列。

具體的，上述載體包含SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

該載體可進一步由可編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列與表達載體經重組得到。所述表達載體為含有轉錄和翻譯插入的編碼序列所需的元件的空載體。

上述表達載體可為pET-32a等。

具體的，上述載體可由SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列插入pET-32a等表達載體經重組得到。

本申請還進一步提供了一種重組細胞，該重組細胞可包含編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列。

具體的，該重組細胞包含SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

該重組細胞可包含載體，該載體包含編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列。

具體的，該重組細胞包含載體，該載體包含SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

該重組細胞可包含載體，該載體可由編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列與表達載體經重組得到。

具體的，該重組細胞可包含載體，該載體可由SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列與表達載體經重組得到。

具體的，所述表達載體可為pET-32a等。

進一步具體的，該重組細胞包含的載體為：SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列插入pET-32a等表達載體經重組得到的載體。

上述重組細胞的宿主細胞可為BL21等。

本申請還提供了上述突變型Taq酶的制備方法，其包括：

（1）構建含有可編碼上述突變型Taq酶的核苷酸序列的載體；

（2）將步驟（1）的載體轉化宿主細胞獲得重組細胞；

（3）培養并收集重組細胞，純化提取突變型Taq酶。

本申請還公開了一種聚合酶試劑，所述聚合酶試劑中含有上述突變型Taq酶。

本申請同時公開了上述突變型Taq酶在PCR中的應用。