[發明專利]抗藍舌病病毒VP7蛋白的單克隆抗體，分泌該抗體的雜交瘤細胞株及應用

有效

• 申請號: 201210213073.X
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN102776152A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 吳東來;徐青元;劉霓紅;楊濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所;哈爾濱維科生物技術開發公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一株雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體，尤其涉及一株分泌抗藍舌病病毒VP7蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其所分泌的單克隆抗體。本發明還涉及上述雜交瘤細胞株和單克隆抗體在制備診斷藍舌病病毒感染動物試劑中的應用，屬于藍舌病的防治領域。?

背景技術

藍舌病（Bluetongue?disease,BT）是由藍舌病病毒（Bluetongue?disease?virus，BTV）引起的，通過吸血昆蟲傳播的反芻動物病毒性傳染病,以口腔、鼻腔和胃腸道黏膜發生潰瘍性炎癥變化為特征。BTV為雙股RNA病毒，其基因組包含10個節段，大小約為19kb。BTV為呼腸孤病毒科（Reoviridae）環狀病毒屬（Orbivirus）藍舌病病毒亞群（Bluetingue?virus?subgroup）的成員之一，環狀病毒屬共有14個亞群，其中藍舌病病毒亞群與鹿出血癥病毒亞群有較強的交叉反應性。BT最早于1876年發現于南非的綿羊，由于發病綿羊持續高熱，口腔出現潰瘍損傷，口腔粘膜及舌頭發藍，因此，于1906年提議定名為“藍舌病”，牛的BT發現于1943年。BTV幾乎可以感染所有的反芻動物，包括家養和野生的牛、山羊和某些野生動物。牛、山羊、鹿及羚羊等野生反芻動物可長期帶毒，并在疾病流間歇期扮演著病毒宿主的角色。而吸血昆蟲，特別是庫蠓是其主要傳播媒介。1940年前本病僅限于撒哈拉以南的非洲大陸，到40年代已蔓延至中東一些國家和地區，例如：塞浦路斯、敘利亞、伊拉克、土耳其、以色列和巴勒斯坦。1948年美國報道此病。70年代后期本病廣泛分布于熱帶、亞熱帶國家。1956～1957年在歐洲尤其是西班牙和葡萄牙流行。1978在澳大利亞的庫蠓體內分離到BTV。目前，熱帶和亞熱帶地區絕大多數國家的易感動物都可能感染BTV或與之密切相關的病毒。我國于1979年在云南師宗首先發現本病并分離出BTV，從而確定了本病在國內的存在，隨后在湖北（1983）、安徽（1985）、四川（1988）、甘肅（1990）、山西（1991）等29個省均檢出BTV血清學陽性牲畜。近年來，隨著全球氣候變暖，BT在許多?國家相繼爆發，且分布范圍不斷擴大。2006年8月，德國、比利時、法國、荷蘭等首次發現牛感染BT，2007年7月，英國、法國、意大利等國爆發本病。世界動物衛生組織（OIE）通報，2008年3月～4月，法國、意大利等國爆發了BT，2009年1月～12月，英國、法國、意大利、澳大利亞、希臘、以色列、丹麥、捷克、瑞典、挪威、西班牙、德國、奧地利、葡萄牙、匈牙利、荷蘭、阿曼、阿爾及利亞、摩洛哥和突尼斯等國先后爆發BT。?

由于BTV有24個血清型，各個國家血清型分布不均一，到目前為止，并沒有有效的疫苗來防治本病，所以，早期準確診斷，早期預防，是防止本病爆發的最有效方法。鑒于我國已在多數省份和地區檢測到該病，加之國際貿易中本病存在的風險，故我國急需加強對該病的研究，做好可對其進行防控和檢測的技術儲備，特別是建立BT的實驗室診斷方法尤為重要。?

VP7是一種極端疏水的蛋白質，具有349個氨基酸，比較VP7蛋白的一級結構，發現各血清型BTV-VP7蛋白中94%以上的氨基酸保守，包括第255位的賴氨酸。氨基酸序列的保守決定了VP7是群特異性抗原這一特征。目前已有實驗證實了VP7蛋白存在絕對保守區域，更為重要的是，VP7是病毒核心顆粒上的主要暴露蛋白，至少有兩個表位暴露于病毒表面，這些特性均表明VP7可以作為檢測BT的理想靶抗原。?

發明內容

本發明的目的之一是提供一株能夠分泌抗藍舌病病毒VP7蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株；?

本發明的目的之二是提供一種可與24個血清型藍舌病病毒（BTV）發生特異性反應，而與IBAV、CV、AKAV、BVDV、IBRV、BRV、RV、BEV和FMDV不發生反應的單克隆抗體；?

本發明的目的之三是提供以上所述的雜交瘤細胞株及其分泌的抗體在制備診斷或檢測藍舌病病毒（BTV）感染動物試劑中的應用。?

本發明是通過以下技術方案來實現的：?