[發明專利]一種檢測手性氨基酸濃度的方法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201210211371.5
• 申請日: 2012-06-25
• 公開（公告）號: CN102692409A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 曹旭妮;倪志堯;夏琨
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種檢測手性氨基酸濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）在待檢樣品中加入D-氨基酸氧化酶或者L-氨基酸氧化酶進行酶催化反應；

2）在步驟1）所得的反應液中依次加入緩沖液、魯米諾、辣根過氧化物酶進行化學發光反應；

3）測定步驟2）所得的反應液的發光強度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述的酶催化反應的反應體系中，還包括常規的緩沖溶液，所述的反應體系的pH值為7.5~9.5，D-氨基酸氧化酶或者L-氨基酸氧化酶的濃度大于0.01U/ml，酶催化反應的反應溫度為20~45°C，反應時間1~15分鐘；步驟2）所述的化學發光反應的反應體系pH值大于9.0，魯米諾的終濃度為1.0×10^-5~1.0×10^-3mol/L，辣根過氧化物酶為0.1~5.0U/ml，發光反應的反應溫度為10~45°C，反應時間為1~10分鐘。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟1）所述的酶催化反應中，所述的氨基酸氧化酶是D-氨基酸氧化酶，所述的緩沖液為10mM，pH8.3的磷酸緩沖液，所述的反應溫度為25°C，反應時間為10分鐘。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟1）所述的酶催化反應中，所述的氨基酸氧化酶是L-氨基酸氧化酶，所述的緩沖液為100mM，pH8.8的磷酸緩沖液，所述的反應溫度為37°C，反應時間為10分鐘。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟2）所述的化學發光反應中，所述的緩沖液為0.1mol/L，pH10的磷酸緩沖液，所述的反應體系中，魯米諾濃度為1.0×10^-4mol/L，辣根過氧化物酶濃度為0.22~0.36U/ml，所述的發光反應的溫度為25°C，反應時間為1~10分鐘。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的待檢樣品在進行步驟1）前還采用陽離子交換固相萃取法除去樣品中的金屬離子。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的陽離子交換固相萃取法包括：將待檢樣品的pH調節為5.0，采用常規的方法將SCX?SPE小柱活化后，將樣品通過SCX?SPE小柱，用4%氨水溶液洗脫，收集洗脫液，即可。

8.一種化學發光法檢測手性氨基酸濃度的試劑盒，其特征在于，包括以下試劑：

1）D-氨基酸氧化酶或者L-氨基酸氧化酶；

2）魯米諾溶液；

3）辣根過氧化物酶；和

4）緩沖液。

9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，試劑2）所述的魯米諾溶液是1.0×10^-3mol/L的魯米諾水溶液；試劑4）所述的緩沖液是10-100mM，pH?8-10的磷酸緩沖液。

10.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括陽離子交換固相萃取柱。