[發明專利]一種南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝和磷脂酰絲氨酸的制備方法

有效

• 申請號: 201210209670.5
• 申請日: 2012-06-22
• 公開（公告）號: CN103509047A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 蔣鋒鋒;包琦
• 申請（專利權）人: 上海傲碩生物科技有限公司
• 主分類號: C07F9/10
• 分類號: C07F9/10;C12P13/04
• 代理公司: 上海富石律師事務所 31265
• 代理人: 沈其梅

1.一種南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，包括下述步驟：

（a）收集南極磷蝦頭，加水，煎煮，攪拌，將磷蝦頭煎煮液送至冷榨機中固液分離，獲得富含磷脂的油狀液體和磷蝦頭等固體；

（b）在磷蝦頭等固體中加入無水乙醇，高剪切萃取，離心分離獲得上清液；本步驟進行1-2次，合并上清液，濃縮獲得油狀液體；

（c）將步驟（a）和步驟（b）中的油狀液體合并、減壓干燥，獲得含有磷脂及不飽和脂肪酸的蛋白凝固物；

（d）將含有磷脂及不飽和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品級有機溶劑中，經板框過濾機過濾去除不溶性物質，過濾后獲得的液體再經膜分離濃縮，獲得濃縮液；

（e）濃縮液經柱層析分離純化，獲得磷脂酰膽堿混合物；再經冷凍干燥，獲得磷脂酰膽堿產品。

2.如權利要求1所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（a）中磷蝦頭在解凍后2h內，加水，40-55℃煎煮，攪拌時加入乙醇。

3.如權利要求1所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（b）中上清液經減壓濃縮，獲得油狀液體。

4.如權利要求1所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（d）中食品級有機溶劑為乙醇和正己烷。

5.如權利要求4所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（d）中，乙醇：正己烷的體積比為2-4:0.5-1.5。

6.如權利要求1-5任一權利要求所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（d）中，采用超濾膜分離，料液比W:V為1:20，溫度10-55℃，采用口徑100nm→20nm雙膜法分離。

7.如權利要求1-5任一權利要求南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（d）中，膜分離中采用微濾膜或超濾膜，所述膜的孔徑為0.02-10μm、在膜上施加壓力0.015~10MPa。

8.如權利要求1-5任一權利要求所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（e）中先將濃縮液溶解于正己烷、異丙醇、水組成的流動相中，固定相選用50-400目粗孔硅膠或大孔樹脂。

9.如權利要求8所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（e）柱層析時，所述柱子徑高比1：5-10，所述洗脫劑選自正己烷的水溶液、異丙醇的水溶液或正己烷和異丙醇的水溶液。

10.如權利要求8所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述固定相選用100-200目粗孔硅膠。

11.如權利要求7所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述步驟（d）中，采用超濾膜分離，料液比W:V為1:20，溫度10-55℃，采用口徑100nm→20nm雙膜法分離。

12.如權利要求9或10所述南極磷蝦來源的磷脂酰膽堿的提取工藝，其特征在于，所述流動相中正己烷：異丙醇：水體積比為1:1:0.16。

13.一種南極磷蝦來源的磷脂酰絲氨酸的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

（a）收集南極磷蝦頭，加水煎煮，攪拌，將磷蝦頭煎煮液送至冷榨機中固液分離，獲得富含磷脂的油狀液體和磷蝦頭等固體；

（b）在磷蝦頭等固體中加入無水乙醇，高剪切萃取，離心分離獲得上清液；本步驟萃取1-2次，合并上清液，濃縮獲得油狀液體；

（c）將步驟（a）和步驟（b）中的油狀液體合并、減壓干燥，獲得含有磷脂及不飽和脂肪酸的蛋白凝固物；

（d）將含有磷脂及不飽和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品級有機溶劑中，經板框過濾機過濾去除不溶性物質，過濾后獲得的液體再經膜分離濃縮，獲得濃縮液；

（e）濃縮液經柱層析分離純化，獲得磷脂酰膽堿混合物；再經冷凍干燥，獲得磷脂酰膽堿；

（f）在水相中，加入L-絲氨酸、磷脂酶D、氯化鈣，水解磷脂酰膽堿，生成磷脂酰絲氨酸；去除溶劑，獲得磷脂酰絲氨酸粗產品；

（g）將磷脂酰絲氨酸粗產品經2-4次食品級有機溶劑反復萃取，第一次萃取時將pH調節到3，去除有機溶劑，獲得磷脂酰絲氨酸產物。