[發明專利]一種從橄欖葉提取橄欖苦甙和穗花杉雙黃酮的方法

有效

• 申請號: 201210209154.2
• 申請日: 2012-06-25
• 公開（公告）號: CN102731592A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 李蘭嵐;王斯成;代洪波
• 申請（專利權）人: 向華
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/08;C07D311/30;C07D311/40
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技術領域

本發明屬于天然產物化學的技術領域，具體涉及一種從橄欖葉中分離提取高純度橄欖苦甙和穗花杉雙黃酮的方法。

背景技術

油橄欖（Olea?europaea?L.），又稱洋橄欖、齊墩果，為木犀科（Oledceae）木犀欖屬（Olea?L）植物，昌世界名貴常綠木本油料和果用樹種。油橄欖原產小亞細亞，經引種進入我國，現有油橄欖面積約50萬畝。

油橄欖以葉和果實入藥用于治療多種疾病，橄欖葉的煎劑或浸劑在地中海國家常作為糖尿病的民間用藥，有一定的療效。油橄欖葉提取可用做膳食補充劑以增強免疫功能。現有資料表明油橄欖具有抗心率不齊，抗真菌，抗高膽固醇，降血糖，降血壓，抗炎，抗氧化，抗病毒，利尿等多種藥理活性。從油橄欖葉中分離得到的化學成分可分為：黃酮類、糖類、萜類、有機酸類及其它化合物。橄欖苦昔的藥理作用主要有降血壓、抗氧化、抗微生物和抗癌等作用。

橄欖葉中還含有穗花杉雙黃酮，依賴性地清除二苯代苦味酰肼(DPPH)自由基，并能顯著減輕溶血性磷脂酰膽堿(LPC)所致的ECV304細胞損傷。穗花杉雙黃酮可通過抑制轉錄因子NF-κB的活化，抑制一氧化氮合酶的誘導生成，從而發揮抗炎活性，另外還具有體外降糖的效果。

目前國內有報道用橄欖葉提取加工橄欖葉提取物，但大多采用簡單水提或醇提后直接噴霧干燥成分，產品中橄欖苦甙、總酚及黃酮含量低。在2007年《青橄欖葉的化學成分研究》文獻中報道了從橄欖葉分離到了穗花杉雙黃酮。王成章也報道了橄欖苦甙在橄欖葉中比果實和樹皮中含量要高得多。公開號為CN101955503A的中國專利介紹了一種橄欖苦甙的制備方法，取多花素馨花作為原料，采用超臨界CO₂萃取技術進行提取，有機溶劑萃取，大孔樹脂吸附分離，濃縮過濾，結晶重結晶得到橄欖苦甙。此方法因為原材料是花部分，對大規模制備橄欖苦甙有一定難度，另外，在目前生產過程中超臨界CO₂萃取技術很少應用，主要是一次投料生產量小，生產設備成本過高，所以這一技術很難應用于生產。公開號為CN102060893A的中國專利介紹了一種從油橄欖葉中同步制備橄欖苦苷和橄欖總黃酮的工藝方法，雖然采用了大孔吸附樹脂串聯吸附、梯度解吸附，分離開了大部分的物質，但將解吸液回收有機溶劑后直接噴霧干燥，分別得到較高含量的橄欖苦苷和橄欖總黃酮提取物產品。此方法分離過程太長，造成其有效成分得率過低，另外將解吸液直接噴霧干燥，解吸液中金屬離子以鹽的形式存在于產品中，其它雜質也會降低其有效成分含量。

發明內容

本發明采用的技術方案包括：干燥過后的油橄欖葉經用乙醇溶液提取、過濾、減壓濃縮，萃取，然后用樹脂吸附、乙醇洗脫、將洗脫液濃縮，結晶與重結晶制得橄欖苦甙和穗花杉雙黃酮純品。

因此，本發明提供一種從橄欖葉提取橄欖苦甙和穗花杉雙黃酮的方法，步驟包括：

(1)粉碎橄欖葉，并將橄欖葉、60%乙醇按重量(kg)/體積比(L)=1:1-8進行混合，加熱至50℃左右進行回流提取；

(2)過濾除渣后，在50℃減壓濃縮至無乙醇味；

(3)將濃縮液用2-3倍體積的乙酸乙酯分三次進行萃取，分離得到三次乙酸乙酯層萃取液，合并其萃取液，并在50℃將其萃取液進行減壓濃縮，直至獲得干燥物；

(4)將干燥物用等重量水進行溶解，上H—103大孔樹脂進行吸附，用40%乙醇進行洗脫，收集洗脫液Ⅰ，再用70%乙醇進行洗脫，收集洗脫液Ⅱ；

(5)將洗脫液Ⅰ進行減壓濃縮至原有體積的1/4-1/5，加入三倍體積的無水乙醇進行結晶和重結晶，得橄欖苦甙；

(6)將洗脫液Ⅱ進行減壓濃縮至原有體積的1/5-1/6，加入二倍體積的丙酮進行結晶和重結晶，得穗花杉雙黃酮。

在一個實施方案中，步驟(2)的回流提取時間為5小時至18小時。

在一個實施方案中，步驟(2)的過濾過程是紗布過濾、陶瓷膜過濾。其中，優選是三層紗布過濾2次、陶瓷膜過濾1次。

在一個實施方案中，步驟(5)、(6)中進行結晶和重結晶時結晶溫度在低溫下進行，優選是在4℃左右。

技術效果

1、本發明方法中所用的原料、設備均為常見的普通原料、設備，避免了工業化生產過程中對于昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了生產成本。

2、本發明所用的試劑均為無毒、廉價、量產的化學試劑，整個過程中可利用成熟的試劑回收的常規技術，這極大地降低了向環境排放廢棄物。