[發明專利]一種快速高效測定葡萄酒中黃烷醇的方法

有效

• 申請號: 201210208957.6
• 申請日: 2012-06-25
• 公開（公告）號: CN102721759A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 唐柯;徐巖
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/26
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

一種快速高效測定葡萄酒中黃烷醇的方法，具體涉及到采用超高效液相色譜（UPLC）技術分析葡萄酒中黃烷醇的方法，屬于葡萄酒風味物質分析技術領域。

背景技術

黃烷醇類物質是葡萄酒中一類重要的酚類化合物，黃烷醇具有極強的抗氧化能力，從而具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗血栓、抗自由基、心血管保護等多種生理保健功能。黃烷醇與葡萄酒的品質同樣具有密切的關系，研究表明，葡萄酒中的黃烷醇能夠影響葡萄酒的許多感官特征，如顏色、苦味、收斂性等等。因此，建立一種簡單、快速、準確分離和測定葡萄酒中黃烷醇的分析方法，對于葡萄酒中黃烷醇的進一步研究有著重要的意義。

黃烷醇均具有共同的母核，即2-苯基氧雜萘。其結構相似、分子量相近、極性相仿，這使得分離十分困難。再加上葡萄酒中其它多酚物質非常多，干擾大，使得黃烷醇單體分離及測定非常困難。長期以來，形成了許多種測定方法。早期黃烷醇多采用化學比色法測定，但由于這類試劑不僅僅與黃烷醇類發生反應，因而在沒有結合較好的前處理分離技術的前提下，所得數據是不可靠的。隨著分離技術的發展，高效液相色譜（HPLC）法成為測定樣品中黃烷醇的首選方法。許多學者利用HPLC對食品中的黃烷醇進行了測定。同時，為了減少或消除其它酚類物質對測定的干擾，多首先利用色譜柱，如聚酰胺柱、C18?Sep-Pak柱等對樣品進行分離，或對提取方法加以改進后，采用HPLC法對其進行定量分析。但利用HPLC檢測葡萄酒中黃烷醇仍存在檢測時間長，前處理復雜等缺點。目前基于HPLC的黃烷醇測定方法并不能快速高效的對葡萄酒中黃烷醇進行定性和定量分析。

發明內容

本發明的目的是為解決現有的黃烷醇測定方法存在成本高，前處理復雜等問題，提供了一種利用超高效液相色譜儀對葡萄酒中黃烷醇進行定性、定量分析的方法。

本發明的技術方案：一種快速高效測定葡萄酒中黃烷醇的方法，利用超高效液相色譜UPLC和二極管陣列檢測器同時對葡萄酒中5種黃烷醇進行分離和測定；

所述5種黃烷醇分別為：兒茶素、表兒茶素、表倍兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表倍兒茶素沒食子酸酯；測定步驟為：

（1）標準溶液配置：

分別精確稱取兒茶素等5種黃烷醇2.3-16.0?mg，用甲醇溶解并轉移至10?mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，封口，作為標準貯備液，在-20℃保存備用。使用前，根據實驗需要將此標準貯備液用甲醇稀釋至適宜含量，以配制標準工作液和混合標準工作液。

（2）葡萄酒樣品進樣前無需任何前處理，直接過0.45?μm濾膜即可進樣。

（3）色譜分離檢測條件：

檢測儀器：Waters?ACQUITY?UPLC?H-Class超高效液相色譜儀，包括四元溶劑管理器（QSM），樣品管理器（SM-FTN），色譜柱溫箱，光電二極管陣列檢測器（PDA）。

色譜條件：美國bridge?ethylene?hybrid?(BEH)?C18色譜柱?(100?mm?×?2.1?mm，1.7?μm，Waters)，或同類UPLC?C18色譜柱。紫外檢測為280nm，柱溫30℃，進樣量為1?μL，以峰面積外標法定量。

流動相：流動相A為2%乙酸水；B為甲醇；流速為0.3?mL/min。

洗脫程序：0-5.5?min，流動相A為92％-75％，流動相B為8％-25％；5.5-6.5?min，流動相A為75％-60％，流動相B為25％-40％；6.5-8.6?min，流動相A為60％-92％，流動相B為40％-8％；8.6-10?min，流動相A為92％，流動相B為8％。

（4）定性：

對5種黃烷醇混合標準品進行色譜檢測，得到5種黃烷醇標準品色譜圖（如圖1所示）；對葡萄酒樣品進行色譜檢測，得到葡萄酒樣品中5種黃烷醇的UPLC色譜圖（如圖2所示）。結果表明，5種黃烷醇標準品和葡萄酒樣品在上述色譜條件下，能夠充分分離。

用增高法進行定性，圖1所示的5種黃烷醇標準品出峰順序依次為：表倍兒茶素（EGC，3.666?min）、兒茶素（CAT，3.843?min）、表倍兒茶素沒食子酸酯（EGCG，5.230?min）、表兒茶素（EC，5.823?min）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG、7.190?min）。

（5）制作標準曲線，定量：